[发明专利]急性冠脉综合征生化标记物的质谱试剂盒及制备方法

说明书

技术领域

本发明属于蛋白质检测技术领域，特别涉及基于质谱技术的用于对急性冠脉综合征生物样品中生化标记物分析的试剂盒制备方法，从复杂生物样品中富集和纯化急性冠脉综合征中的新型生化标记物。

背景技术

不论是细胞的正常功能还是病理特性都在一定程度上取决于细胞所表达的蛋白质功能。因此，鉴定人体内表达的蛋白质的区别，可用于体外疾病样本诊断及筛查，并最终用于药物开发和疾病治疗。而要进行蛋白质表达和功能的差异化分析，要求能够达到分辨细胞内分子的复杂混合物的程度。但细胞内许多物质往往以微量存在，目前用于分析蛋白的方法在上述各方面都有局限，用这些常规手段难以进行鉴定分析。用质谱联合可克服这一技术缺点。

急性冠脉综合征(Acute Coronary Syndrome，ACS)生化标记物的研究一直是该领域的热点问题之一。随着人们对于ACS认识的深入及治疗策略的变化，近年来人们对于蛋白标记物研究的重点发生了转移，关注的焦点从既往所期许的更好的早期的诊断蛋白上转换到了对临床危险性分层具有良好提示意义的蛋白研究上。换而言之就是希望寻找能够早期识别预后不佳，易发生恶性事件的高危人群的预测蛋白，通过对于预测蛋白水平的检测进行早期识别，正确评价患者危险性，从而给予更加积极主动的干预以实现医疗资源的合理应用。许多心血管蛋白标志物如高敏C反应蛋白，Pro-BNP，白介素家族，选择素等蛋白都进入了人们研究的视野，并取得了一定的成果。如Pro-BNP对于心梗患者的死亡发生具有强烈的预测作用，而白介素-6，E选择素等则被认为与心肌坏死程度有关，因此可能对于ACS患者预后具有一定的提示意义。但目前的研究的思路均是在探讨心血管领域已知活性蛋白与ACS患者预后之间的关系，而该类蛋白在目前已知的活性蛋白中可谓是沧海一粟，因此思路非常局限。质谱技术的出现则为临床提供了一个高效的检测工具，赋予研究者更为广阔的视角，帮助大家从浩瀚的蛋白库中寻找最符合要求的蛋白标志物。

目前在进行蛋白质质谱分析时还没有发现一个用于临床急性冠脉综合征(Acute Coronary Syndrome，ACS)生化标记物检测的标准化质谱试剂盒。

发明内容

本发明的目的是克服已有技术的不足之处，提出一种用于检测临床急性冠脉综合征生化标记物的质谱试剂盒及制备方法，该试剂盒为急性冠脉综合征的早期检测提供了新的途径，并为进一步发现新的急性冠脉综合征生物标志提供了基础。

本发明提出的用于检测急性冠脉综合征生物标志的质谱试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括：

一小管粘合液，10～30μl；

一小管质谱标准化质控血清(浆)，10～30μl；

一小管MB-WCX磁珠或金属亲和表面(MB-IMAC Fe)磁珠30～50μl；

一小管清洗液300～500μl，该清洗液为50～100mM PBS或NaAc，pH值为4.0～5.0；

[清洗液pH值为3.0～6.0时，蛋白指纹检测发现，pH值为4.0～5.0清洗液时蛋白指纹检测最好(蛋白峰最多)(图1)]。

一小管洗提液10～50μl，该洗提液为1～5％三氟乙酸的水溶液；

一小管稳定剂5～10μl，该稳定剂由能量吸收分子溶解在含30～60％乙腈和0.5～1％三氟乙酸的水溶液中构成，该能量吸收分子可采用肉桂酸衍生物、芥子酸、二羟基苯甲酸之中的任一种；上述各小管置于4℃冷藏盒中。

本发明提出的上述质谱试剂盒制备方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

1)含粘合液的质谱标准化质控血清(浆)的制备：将男性、女性等量的O型血清(浆)稀释在粘合液中制成质谱的标准化质控血清(浆)，加10％牛胰岛素(bovine insulin，5733Da)，并将该稀释的血清(浆)分装成10～30μl小管中；其中，血清(浆)∶粘合液＝1∶2，所述粘合液为9M Urea，2％CHAPS，50mM Tris-HCL，pH 7.0～9.0；

2)将购买的50～100mM PBS(Phosphate-Buffered Saline)或NaAc，pH值为4.0～5.0清洗液、1～5％三氟乙酸的洗提液分别分装成300～500μl小管和10～50μl小管；

3)将能量吸收分子溶解30～60％乙腈和0.5～1％三氟乙酸的水溶液中制成稳定剂，并分装成5～10μl小管，该能量吸收分子可采用肉桂酸衍生物、芥子酸、二羟基苯甲酸之中的任一种；

4)将上述分装好的各小管置于4℃冷藏箱中。

本发明还提出所述的试剂盒对急性冠脉综合征生物标志的预后判断的应用。