[发明专利]降脂宁高效液相色谱指纹图谱的测定方法

权利要求书

1.一种降脂宁的高效液相色谱指纹图谱检测方法，其特征在于包括参照物溶液的制备、供试品溶液的制备、色谱条件、指纹图谱的测定与建立、指纹图谱相似度计算和方法学验证，其特征在于包括如下主要步骤：

参照物溶液的制备：精密称取2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷对照品3～10mg，置5～25mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，精密移取0.5～5mL，置5～25mL量瓶中，加30～70％甲醇稀释至刻度，摇匀作为参照物溶液；

供试品溶液的制备：称取制何首乌5g，荷叶15g，加入20倍体积份的50％乙醇浸泡1小时后回流提取3小时，滤过，滤渣同上法再回流提取2次，分别为2小时和1小时，合并三次滤液，浓缩至无醇味；称取山楂100g，决明子5g，加入7倍体积份的水，煮2小时，滤过，滤渣加入5倍体积份的水，再煮2小时，合并两次滤液，浓缩；将醇提及水煮浓缩液合并，混合均匀，加蒸馏水调整体积为500～1500mL；量取25～100mL上述水溶液再加水稀释成50～200mL溶液作为上样液，通过25～150mL AB-8或D101或HPD300型大孔吸附树脂柱，水洗2～7个柱体积后用30～70％乙醇2～7个柱体积进行洗脱，收集30～70％乙醇洗脱液，回收溶剂，蒸干，得到30～70％乙醇洗脱部分；取30～70％乙醇洗脱部分10～50mg，精密称定，置锥形瓶中，加30～70％乙醇5～25mL，称定重量，超声提取15～45min，放冷，再称定重量，用30～70％乙醇补足减失的重量，摇匀，0.22μm或0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；

高效液相色谱条件为：流动相为0.01％甲酸水溶液-乙腈混合溶剂梯度洗脱如下：0→40min，97∶3→86∶14；40→65min，86∶14→84∶16；65→100min，84∶16→70∶30；100→110min，70∶30→50∶50；110→120min，50∶50→0∶100；120→130min，0∶100→0∶100)；流速为0.8～1.2mL/min，检测波长为275～285nm；柱温为25～35℃。

2.如权利要求1所述的降脂宁高效液相色谱指纹图谱的检测方法，其特征在于降脂宁高效液相色谱指纹图谱有29个共有色谱峰，以16号峰2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷峰为参照峰，计算各共有峰相对保留时间和相对峰面积；其中：

单峰面积超过总峰面积20％的色谱峰1个：19号峰相对保留时间1.11～1.13，RSD小于1％；相对峰面积1.73～1.76，RSD小于5％；

单峰面积占总峰面积10～20％的色谱峰2个：2号峰相对保留时间0.19～0.20，RSD小于1％；相对峰面积1.23～1.25，RSD小于5％、16号峰参照峰；

单峰面积占总峰面积5～10％的色谱峰2个：10号峰相对保留时间0.50～0.52，RSD小于1％；相对峰面积0.44～0.47，RSD小于15％、18号峰相对保留时间1.00～1.10，RSD小于1％；相对峰面积0.37～0.40，RSD小于15％；

单峰面积占总峰面积2～5％的色谱峰4个：3号峰相对保留时间0.22～0.24，RSD小于1％；相对峰面积0.16～0.18，RSD小于5％、4号峰相对保留时间0.27～0.29，RSD小于1％；相对峰面积0.19～0.21，RSD小于5％、14号峰相对保留时间0.68～0.71，RSD小于1％；相对峰面积0.34～0.37，RSD小于15％、22号峰相对保留时间1.32～1.34，RSD小于1％；相对峰面积0.35～0.37，RSD小于10％。