[发明专利]降脂宁高效液相色谱指纹图谱的测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种降脂宁指纹图谱的测定方法，具体地说是用高效液相色谱(HPLC)指纹图谱方法来评价和控制降脂宁质量的一种方法。

背景技术

降脂宁收载于《中华人民共和国卫生部药品标准》(中药)第十三册，由山楂、制首乌、决明子、荷叶4味中药组成，具有温通经脉、扶正疏风、通经活络的功效。现代药理研究表明降脂宁具有降血脂、软化血管作用，临床使用广泛，疗效显著。但目前有关降脂宁的质量控制和评价方法，非常简单，仅有鉴别项(采用化学反应鉴别生物碱、蒽醌和黄酮)收载于《中华人民共和国卫生部药品标准》(中药)第十三册降脂宁项下，水平很低，导致临床疗效不稳定，安全性存在隐患。因此，迫切需要建立降脂宁合理的质量评价体系，以改进药品生产工艺、提升药品质量、促进药品二次开发、实现药品的现代化，最终保证临床用药的安全有效。目前亦未见有关降脂宁质量评价方法的相关专利。指纹图谱技术是目前在中药有效成分绝大多数尚不能明确的情况下，有效控制和评价中药材和中成药质量的一种有效手段，体现了中药质量控制和评价模式向综合的、宏观的、可量化的定性鉴别与主要有效成分定量分析相结合的发展趋势。用指纹图谱方法控制和评价降脂宁的质量，从整体上有效地表征其质量，具有重要的学术意义和很强的实用价值。

技术方案

本发明的目的在于提供一种降脂宁的高效液相色谱指纹图谱的测定方法。

本发明的目的是通过如下技术方案实现的：

1.参照物溶液的制备

精密称取2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷对照品3～10mg，置5～25mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，精密移取0.5～5mL，置5～25mL量瓶中，加30～70％甲醇稀释至刻度，摇匀，作为参照物溶液。

2.供试品溶液的制备

称取制何首乌5g，荷叶15g，加入20倍体积份的50％乙醇浸泡1小时后回流提取3小时，滤过，滤渣同上法再回流提取2次，分别为2小时和1小时，合并三次滤液，浓缩至无醇味。称取山楂100g，决明子5g，加入7倍体积份的水，煮2小时，滤过，滤渣加入5倍体积份的水，再煮2小时，合并两次滤液，浓缩。将醇提及水煮浓缩液合并，混合均匀，加蒸馏水调整体积为500～1500mL。量取25～100mL上述水溶液再加水稀释成50～200mL溶液作为上样液，通过25～150mLAB-8或D101或HPD300型大孔吸附树脂柱，水洗2～7个柱体积后用30～70％乙醇2～7个柱体积进行洗脱，收集30～70％乙醇洗脱液，回收溶剂，蒸干，得到30～70％乙醇洗脱部分。取30～70％乙醇洗脱部分约10～50mg，精密称定，置锥形瓶中，加30～70％乙醇5～25mL，称定重量，超声提取15～45min，放冷，再称定重量，用30～70％乙醇补足减失的重量，摇匀，0.22μm或0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。

3.色谱条件

色谱柱：Agilent TC-C₁₈柱(4.6mm×250mm，5μm)，流动相：0.01％甲酸水溶液-乙腈混合溶剂梯度洗脱(梯度洗脱条件如表1)；流速：0.8～1.2mL/min；检测波长：275～285nm；柱温：25～35℃。

表1 梯度洗脱条件表

4.指纹图谱测定与建立

精密吸取供试品溶液注入液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，得到降脂宁指纹图谱。该指纹图谱有29个共有色谱峰，选择2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷峰(16号峰)作为参照峰，计算各共有峰相对保留时间和相对峰面积。

其中：

单峰面积超过总峰面积20％的色谱峰1个：19号峰(相对保留时间1.11～1.13，RSD小于1％；相对峰面积1.73～1.76，RSD小于5％)。

单峰面积占总峰面积10～20％的色谱峰2个：2号峰(相对保留时间0.19～0.20，RSD小于1％；相对峰面积1.23～1.25，RSD小于5％)、16号峰(参照峰)。

单峰面积占总峰面积5～10％的色谱峰2个：10号峰(相对保留时间0.50～0.52，RSD小于1％；相对峰面积0.44～0.47，RSD小于15％)、18号峰(相对保留时间1.00～1.10，RSD小于1％；相对峰面积0.37～0.40，RSD小于15％)。