[发明专利]一种鲨鱼硫酸软骨素的提取方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种硫酸软骨素的提取方法，具体地说涉及一种 鲨鱼硫酸软骨素的提取方法；属于新型生物工程技术领域。

背景技术

硫酸软骨素是从动物组织中提取的黏多糖类物质，其基本单 位是D-葡萄糖醛酸和N-乙酰-D-氨基半乳糖硫酸酯。一般硫酸软 骨素约含50-70个二糖单位，平均分子量10000-30000。分子中 带有大量的负电荷，具有调脂、抗炎及弱的抗凝血、抗血栓生物 活性，对维持细胞环境的相对稳定性和正常功能具有重要作用。

硫酸软骨素能促进基质中纤维的增长，增强通透性，改善血 液循环，加速新陈代谢，促进渗透液的吸收及炎症的消除；其聚 阴离子具有强的保水性，能改善眼角膜组织的水分代谢，对角膜 有较强的亲和力，能在角膜表面形成一层透气保水膜，促进角膜 创伤的愈合及改善眼部干燥症状。

硫酸软骨素能将水分吸入蛋白多糖分子内，使软骨变厚及有 如海绵般，并增加关节内的滑液量。如此一来，它便能提供“垫 衬”作用以增强关节的减震能力和缓和行走或跳动时的冲击和摩 擦。硫酸软骨素还作为输送管道，为软骨输送重要的氧和营养素， 同时把二氧化碳和废物加以排除。硫酸软骨素还可以抑制破坏软 骨的酵素(例如胶原酶、弹性蛋白酶和组织蛋白酶)，以免软骨被 分解或溶解。

自然界中的硫酸软骨素多存在于动物的软骨、喉骨、鼻骨， 鱼类软骨中含量也很丰富，结缔组织含量很少。目前，市场上硫 酸软骨素多从猪、牛、羊等动物软骨中提取，该类动物的软骨中 硫酸软骨素含量和产品价值都较低。而从鲨鱼软骨中提取的鲨鱼 硫酸软骨素属于纯天然海洋生物活性物质，能够降血脂、抗衰老、 防止动脉粥样硬化，在防治冠心病和心肌梗塞等心血管疾病中有 较好的疗效；还能调节关节机能，用于治疗关节炎和预防结缔组 织相关的疾病；并且具有抗病毒、抗肿瘤、提高机体免疫力的作 用。鲨鱼硫酸软骨素以其独特的生物活性功能在医药和保健品中 有着广泛的应用。

采用传统的稀碱、稀碱-盐、稀碱-酶等提取硫酸软骨素的方 法，产品得率低，蛋白质和氮杂质含量较高；中国专利申请(公 开号：CN101358220A)涉及鲨鱼软骨中提取硫酸软骨素钙的方法， 该方法包括有熟化、碱化、酶解、去蛋白、结晶、树脂预处理、 树脂交换、超滤脱水、滤液钙化、结晶脱水干燥各工序过程组成。 虽然采用该方法可以提高鳖鱼硫酸软骨素的纯度，节约乙醇的使 用量。但是该方法不仅工艺步骤多，工艺流程繁琐；而且酶解后 需要升温将酶灭活过滤，酶不能反复使用，不能进行连续化生产。

发明内容

本发明针对现有技术存在的缺陷，提供一种鲨鱼硫酸软骨素 的提取方法，该方法不仅可以大大减少酒精的用量以及酒精回收 的能耗，而且实现连续化生产。

本发明的目的是通过下列技术方案来实现的：一种鲨鱼硫酸 软骨素的提取方法，该方法包括以下步骤：

A、碱提：选择鲨鱼软骨脱脂后将其粉碎，加入碱溶液和氯化 钠溶液在温度为20-60℃的条件下提取1-10小时，过滤后调滤液 pH值为8.5-9.0；

B、酶解：将上述碱提后的滤液中加入到酶反应器中，加入为 软骨投料量1.0％-5.0％的固定化酶，在pH值为2.0-9.0，温度为 45-55℃的条件下酶解2-10小时；

C、超滤：将酶解后的滤液脱色后，在室温下超滤脱水浓缩至 原体积的1/3-1/2；

D、氧化、结晶：调超滤脱水后的浓缩液pH值为8.5-9.0， 加入为软骨投料量0.5％-3％的双氧水，在温度为15-40℃的条件下 氧化3-8小时过滤，调滤液pH值为5.0-6.0，加入95％乙醇结晶， 使乙醇浓度达65-75％，结晶后离心、洗涤、干燥后得到鲨鱼硫酸 软骨素。

本发明步骤A中脱脂的具体过程是：取鲨鱼软骨在沸水中蒸 煮2-6h，冲洗干净，用乙醇或丙酮浸泡30min去除油脂。碱提 过程中采用间歇搅拌可增大碱和软骨的接触面积，加快碱提速度。 为了提高鲨鱼硫酸软骨素的收率，过滤后的残渣需要用蒸馏水浸 泡后再次过滤，合并过滤液，用HCl调pH值至8.0-9.0。

步骤B中按鲨鱼软骨重量百分比的1.0％-5.0％加入固定化酶。 在该重量百分比范围内，产品的纯度达95％以上，收率达17％以 上，氮含量＜2.8％。酶解过程中保持pH值为2.0-9.0。