[发明专利]同时检测对虾WSSV和IHHNV的方法及所用检测试剂盒

权利要求书

1.一种同时检测对虾WSSV和IHHNV核酸多重等温扩增检测试剂盒，其特征是该试剂 盒包括：

(1)、研磨液管：内装研磨液；

(2)、核酸提取液A管：内装乙酸钠溶液；

(3)、核酸提取液B管：内装无水乙醇；

(4)、核酸提取液C管：内装质量浓度为70％的乙醇；

(5)、TE缓冲液管：内装TE缓冲液；

(6)、UNG酶管：内装尿嘧啶DNA糖基化酶；

(7)、multi-LAMP反应液管：内装multi-LAMP反应液；

所述multi-LAMP反应液由以下组份组成：multi-LAMP引物WSSV-FIP、WSSV-BIP、 IHHNV-FIP和IHHNV-BIP各1～4μM，multi-LAMP引物WSSV-F3、WSSV-B3、IHHNV-F3 和IHHNV-B3各0.1～0.4μM，dATP、dGTP和dCTP各0.5～2mM，dTTP、dUTP各0.25～1mM， Tris-HCl 10～40mM，KCl 10～20mM，(NH₄)₂SO₄ 5～15mM，MgSO₄ 1～4mM，Triton X-100 0.05％～1.0％，Betaine0.8～1.2M；其余为双蒸水；

所述multi-LAMP引物的核酸序列如下：

WSSV-FIP：

5′-CTGCAACCTCAAAAATAGCCTCTGTTTTGGCAGTTTCTTCCGTTCTTTTGT；

WSSV-BIP：

5′-GCGAGCAAGGCAATTTCAGCTTTTCAAATCCAAGAGGCACTCCAAAT；

WSSV-F3：

5′-CTCCTGCGATAAAGGGATGTC；

WSSV-B3：

5′-AGTTGGATGGATTGAGGCGT；

IHHNV-FIP：

5′-GTCCTTGGAGTACAAGAGTGTTTATTTTTAATCTTAGCTTGGATAATCATCGT；

IHHNV-BIP：

5′-GAAAATCTCTTACCATCGGTGCATTTTGAAGGTGTTTGAGTCTCCT；

IHHNV-F3：

5′-CGACATCCGTGTACCAGA；

IHHNV-B3：

5′-AGAGCGTAGGACTTTCCG；

(8)、BstDNA聚合酶管：内装Bst DNA聚合酶；

(9)、显色剂管：内装核酸染料SYBR Green I；

(10)、阳性对照核酸管：内装拷贝数比为1∶1的对虾WSSV和IHHNV阳性DNA；

所述IHHNV DNA的GenBank序列号为：EF633688，目标序列位置为：2195-2410；所述 WSSV DNA的GenBank序列号为：AF369029，目标序列位置为：55303-55517；

(11)、阴性对照管：内装灭菌的双蒸水。

2.根据权利要求书1所述的同时检测对虾WSSV和IHHNV核酸多重等温扩增检测试剂 盒，其特征在于所述研磨液是由以下体积份的组份组成：

1～2M的三羟甲基氨基甲烷溶液5～10份，0.25～1.0M的乙二胺四乙酸二钠溶液0.5～2.0 份，质量浓度5～10％的十二烷基磺酸钠溶液5～10份，巯基乙醇0.01～1.0份，8-羟基喹啉 0.01～0.02份，平衡酚5～10份和氯仿5～10份，以双蒸水定容到100份。