[发明专利]一种新型农药靶标酶海藻糖酶的制备方法

权利要求书

1.一种海藻糖酶的制备方法，其特征在于：

(1)粗酶液的提取

称取家蚕，加入冰磷酸缓冲液中，然后用组织捣碎机搅拌，冷冻离心，收集上清液。即为酶粗提液。

(2)粗提液的纯化

粗提液中加入(NH₄)₂SO₄使之分别达到相应的饱和度，分别搅拌离心，分别收集各阶段的沉淀。将所得的沉淀溶于磷酸缓冲液保存。用磷酸缓冲液透析，所得透析液用冰盐浴冷却，一段时间后，搅拌加入预冷的丙酮溶液，离心去除沉淀，上清液中再加入丙酮液，然后离心收集沉淀。合并两次所得到的沉淀，将其真空干燥即得到海藻糖酶。

2.根据权利(1)中所述的粗酶液的提取，其特征在于：家蚕和磷酸缓冲液的加入的量为m(g)∶V(ml)＝1∶10；所加的磷酸缓冲液浓度为浓度为0.2M，PH为6.5；组织捣碎机的搅拌时间为10min；离心速率为15000rpm，离心时间为10min。

3.根据权利(2)中所述的粗提液的纯化，其特征在于：相应的饱和度分别为10％、30％和70％；保存温度为0℃；透析温度为4℃，透析次数为4次；用冰盐浴冷却到-1℃，冷却时间为15-20min；丙酮溶液为-20℃。