[发明专利]一种灵芝生物碱类物质指纹图谱鉴定方法

权利要求书

1.一种灵芝生物碱类物质指纹图谱鉴定方法，其特征在于所述的方法包 括以下步骤：

(a)标准指纹图谱的制取：取产地各不相同的已知标准品种样品干燥的灵 芝子实体碎片5～10批次、每批次取相同质量的生药量分别进行如下试验： 加入已知样品干燥的灵芝子实体碎片25～35倍质量的乙醇回流提取，过滤 除去滤渣后得到已知样品提取液，已知样品提取液经减压蒸馏除去溶剂， 得已知样品生物碱浸膏液，加甲醇定容得已知样品溶液，控制所述的已知 样品溶液中生药量含量为2～7克/100毫升，已知样品溶液经0.45μm有机 滤膜过滤，得已知样品供试品溶液，取已知样品供试品溶液进行高效液相 色谱分析，得到已知样品灵芝生物碱类物质高效液相色谱图；所述高效液 相色谱的条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，以乙腈、1 vol％醋酸水溶液为流动相进行梯度洗脱，检测波长为254nm；流动相流速 为1mL/min，进样量10μL，分析时间为40min，梯度洗脱程序为：0～8min， 10vol％的1vol％醋酸水溶液和90vol％的乙腈；8～10min，15vol％的1vol％ 醋酸水溶液和85vol％的乙腈；10～15min，30vol％的1vol％醋酸水溶液和 70vol％的乙腈；15～20min，40vol％的1vol％醋酸水溶液和60vol％的乙 腈；20～30min，45vol％的1vol％醋酸水溶液和55vol％的乙腈；30～40min， 50vol％的1vol％醋酸水溶液和50vol％的乙腈；取各批次中高效液相色谱 图的共有吸收峰为特征色谱峰，图中选择归一化峰面积大于1％的特征色谱 峰作为指纹峰，得到灵芝生物碱类物质的标准指纹图谱；

(b)待测样品高效液相色谱图制取：取待测样品干燥的灵芝子实体碎片， 加入待测样品干燥的灵芝子实体碎片25～35倍质量的乙醇回流提取，过滤 除去滤渣后得到待测样品提取液，待测样品提取液经减压蒸馏除去溶剂， 得待测样品生物碱浸膏液，加甲醇定容得待测样品溶液，控制所述的待测 样品溶液中生药量含量与步骤(a)中已知样品溶液的生药量含量相同，待 测样品溶液经0.45μm有机滤膜过滤，得待测样品供试品溶液，取待测样 品供试品溶液进行高效液相色谱分析，所述高效液相色谱的条件为：以十 八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，以乙腈、1vol％醋酸水溶液为流动 相进行梯度洗脱，检测波长为254nm，流动相流速为1mL/min，进样量 10μL，分析时间为40min，梯度洗脱程序为：0～8min，10vol％的1vol％ 醋酸水溶液和90vol％的乙腈；8～10min，15vol％的1vol％醋酸水溶液和 85vol％的乙腈；10～15min，30vol％的1vol％醋酸水溶液和70vol％的乙 腈；15～20min，40vol％的1vol％醋酸水溶液和60vol％的乙腈；2o～30min， 45vol％的1vol％醋酸水溶液和55vol％的乙腈；30～40min，50vol％的1 vol％醋酸水溶液和50vol％的乙腈；得到待测样品灵芝生物碱类物质高效 液相色谱图；

(c)将步骤(b)得到的待测样品灵芝生物碱类物质高效液相色谱图与步 骤(a)得到的灵芝生物碱类物质的标准指纹图谱中的特征色谱峰对照，待 测样品灵芝生物碱类物质高效液相色谱图具有灵芝生物碱类物质的标准 指纹图谱中所有的特征色谱锋，则待测样品为标准品种。