[发明专利]一种灵芝生物碱类物质指纹图谱鉴定方法

说明书

技术领域

本发明属于食用菌及中药材原材料生物碱类物质品质分析技术 鉴定领域，具体涉及灵芝中的生物活性组分生物碱类物质的一种高 效液相色谱指纹图谱的构建方法及分析鉴别方法。

背景技术

灵芝(Ganoderma Lucidum)自古以来被誉为人类延年益寿的灵 丹妙药，滋补益气的仙草。早在我国第一部本草学专著《神农本草经》 中，就认为它具有益心气、安精魂、补肝益气、坚筋骨的作用。李时 珍在《本草纲目》中也对灵芝的食疗保健作用作了高度评价：“赤芝 又名丹芝，气味苦平，无毒。主治胸中结，益心气，补中，增智慧， 不忘。久食轻身不老，延年神仙”。在近几十年来，科学家通过各种 研究，已从多方面证明：灵芝具有很“灵”的祛病强身，扶正固本的 保健作用。尤其对生物免疫与传统治疗肿瘤具有奇特的效果。

近年来大量的化学和药理分析表明：灵芝具体有抗肿瘤、减轻癌 症或其他疾病引起的疼痛、增强免疫、延缓衰老、保肝解毒、治疗高 血压、降血糖、镇咳平喘、抗辐射和抗过敏等多种作用。尤其在抗肿 瘤方面，国内外许多著名的医疗研究机构经研究得出结论：灵芝对胃 癌、肺癌、恶性淋巴瘤、肝癌、乳腺癌、鼻咽癌、肠癌、食道癌、白 血病等多种肿瘤疾病有十分显著的疗效。灵芝之所以具有如此显著的 医疗保健效果，其中的活性物质中，灵芝生物碱类(如二萜类、三萜 类、嘌啉碱、未知生物碱等)是灵芝中一种重要的基础药效成分，其 功效主要包括：保肝；抗肿瘤；降血糖；抗HIV-1及HIV-1蛋白 酶活性；抑制组胺释放；抑制血管紧张素转化酶；抑制胆固醇合成等 作用。因此，灵芝生物碱类具有重要的医药保健价值，目前灵芝通过 不同的加工方式已被开发成多种保健品，灵芝生物碱类物质是其中的 一种产品。

目前国内灵芝种属有很多，如赤芝、黑芝、紫芝、韩芝、白芝 等，其中以赤芝品种居多，由于灵芝栽培随气候条件、区域的差异、 栽培方式、种属不同，灵芝中生物活性组分生物碱类物质有一定的差 别，如何鉴别灵芝中所含的生物活性组分生物碱类物质，对灵芝的品 质鉴别和科学评价具有价值杠杆的意义。目前，对不同灵芝种属、 同品种不同区域、同品种不同栽培方法的生物活性组分生物碱类物质 的鉴别及质量评价还没有建立一个科学的评判方法，也没有相关方面 的方法报道。

发明内容

本发明的目的是为了建立灵芝原材料生物碱类物质的分析鉴别 方法，对灵芝生物碱加工质量控制、原材料真伪鉴别及生物碱类物质 的初步定性定量品质分析提供了一种有效的方法，从而对灵芝的原材 料品质进行科学的评价。

本发明采用的技术方案是：

一种灵芝生物碱类物质指纹图谱鉴定方法，所述的方法包括以 下步骤：

(a)标准指纹图谱的制取：取产地各不相同的已知标准品种样品干 燥的灵芝子实体碎片5～10批次、每批次取相同质量的生药量分别进 行如下试验：加入已知样品干燥的灵芝子实体碎片25～35倍质量的乙 醇回流提取，过滤除去滤渣后得到已知样品提取液，已知样品提取液 经减压蒸馏除去溶剂，得已知样品生物碱浸膏液，加甲醇定容得已知 样品溶液，控制所述的已知样品溶液中生药量含量为2～7克/100毫 升，已知样品溶液经0.45μm有机滤膜过滤，得已知样品供试品溶液， 取已知样品供试品溶液进行高效液相色谱分析，得到已知样品灵芝生 物碱类物质高效液相色谱图；所述高效液相色谱的条件为：以十八烷 基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，以己腈、1vol％醋酸水溶液为流动 相进行梯度洗脱，检测波长为254nm；取各批次中高效液相色谱图的 共有吸收峰为特征色谱峰，图中选择归一化峰面积大于1％的特征色 谱峰作为指纹峰，得到灵芝生物碱类物质的标准指纹图谱；

(b)待测样品高效液相色谱图制取：取待测样品干燥的灵芝子实体 碎片，加入待测样品干燥的灵芝子实体碎片25～35倍质量的乙醇回流 提取，过滤除去滤渣后得到待测样品提取液，待测样品提取液经减压 蒸馏除去溶剂，得待测样品生物碱浸膏液，加甲醇定容得待测样品溶 液，控制所述的待测样品溶液中生药量含量与步骤(a)中已知样品 溶液的生药量含量相同，待测样品溶液经0.45μm有机滤膜过滤，得 待测样品供试品溶液，取待测样品供试品溶液进行高效液相色谱分 析，所述高效液相色谱的条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填料的 色谱柱，以己腈、1vol％醋酸水溶液为流动相进行梯度洗脱，检测波 长为254nm，得到待测样品灵芝生物碱类物质高效液相色谱图；