[发明专利]一种定标测定腺苷脱氨酶活性的方法及其配用的试剂盒和其用途

权利要求书

1.一种定标测定腺苷脱氨酶活性的方法，其特征是：包括以下步骤：

步骤一是确定腺苷脱氨酶标准品的活性；

步骤二是再通过腺苷脱氨酶、嘌呤核苷酸化酶、黄嘌呤氧化酶及过氧化物酶酶解生成醌化合物；

步骤三是以连续监测醌化合物在546nm处吸光度的上升速率结合标准品的活性为参照，定量测定生物样本中腺苷脱氨酶的活性。

2.根据权利要求1所述的一种定标测定腺苷脱氨酶活性的方法，其特征是：所述的步骤一中具体操作为将腺苷脱氨酶样本与试剂RI同时加入，并孵育180秒，然后加入试剂RII，再孵育420秒加入试剂RIII，在340nm处定量测定吸光度，并用不同浓度氨代替底物腺苷，按上述方法在340nm处用测试仪定量测定吸光度，以此画出标准曲线，有腺苷脱氨酶标准品的吸光度从标准曲线上求出对应的氨浓度，并将其除以反应时间既得出腺苷脱氨酶标准品活性。

3.根据权利要求2所述的一种定标测定腺苷脱氨酶活性的方法，其特征是：所述的试剂RI包括0.015mol/L的a-酮戊二酸、0.30×10^-3mol/L的还原型辅酶I二钠盐、1.50×10^-3mol/L的腺嘌呤核苷二磷酸单钠盐以及0.10mol/L的且pH值为7.20的磷酸缓冲液，所述的试剂RII为200U/ml的谷氨酸脱脱氢酶，所述的试剂RIII包括1.20×10^-2mol/L的腺苷，2.00×10^-5mol/L的乙二胺四乙酸二钠，其中所述的试剂RII和试剂RIII均用pH7.20磷酸缓冲液配置。

4.根据权利要求3所述的一种定标测定腺苷脱氨酶活性的方法，其特征是：所述的腺苷脱氨酶样本为10μL，试剂I为200μL，试剂II为20μL，试剂III为50μL，腺苷脱氨酶样本与试剂I同时加入，在第180秒加入试剂II，在第420秒加入试剂III，且温度反应温度控制37℃。

5.根据权利要求4所述的一种定标测定腺苷脱氨酶活性的方法，其特征是：所述的波长的主波长为340nm，副波长为430nm。

6.根据权利要求5所述的一种定标测定腺苷脱氨酶活性的方法，其特征是：所述的步骤三中的计算按以下公式进行计算：

测试时间段每分钟平均吸光度的变化(ΔA/min)，

ΔA/min=(ΔA1/min+ΔA2/min+···············ΔAt/min)t]]>

ΔA₁/min代表测试时间第1min吸光度变化率

ΔA₂/min代表测试时间第2min吸光度变化率

.............................................

ΔA_t/min代表测试时间第tmin吸光度变化率

t为测试时间

样本腺苷脱氨酶活性＝(ΔA_X/ΔA_C)×Ec

其中：ΔA_X＝样本ΔA/min

ΔA_C＝标准品ΔA/min

Ec＝腺苷脱氨酶标准品的活性。