[发明专利]等电等电荷法提取动物血(猪血)中的SOD酶

权利要求书

1.一种从猪血中提取SOD酶的方法，其特征在于：

a、它是用非刺激性有机物进行沉淀分离的的一种方法，它所用试剂如单宁丁醇等都是一种对SOD酶无损害的、温和的溶剂。

b、试剂价格低廉，虽丁醇较昂贵，但可回收循环使用。

2.一种从猪血中提取SOD酶的方法，其特征在于：以该酶蛋白的等电点PH：4.6-4.8为中心，将其他非该蛋白等电点电荷的蛋白进行弃除的方法。

a、由于血中的主要成份是血红蛋白，其除去方法是：用缓冲剂调正处理剂的PH值为6±，这时血红蛋白呈正离子，将单宁以一定量比例投入拌匀，红血蛋白以结合物的形式沉淀，离心弃去之。

b、为了进一步除去≥PH：6的杂蛋白及其未被除尽的血红蛋白，继续采用1/2体积的724弱酸性阳离子交换树脂进行吸附，二者拌合后继续搅拌2-4小时，使之达到平衡，吸附结束，将未被吸附的含有SOD酶的溶液倒出，进行下一步分离。

3.分离弃去其他剩余物质

a、为了除去猪血中含非蛋白的脂类物质，用丁醇-磷酸氢二钾混合液继续清除。方法是：在溶液中加入处理量15％的丁醇和38％的磷酸氢二钾，二者混合，充分搅拌15min，在冰箱中静置15分钟-1小时，将杂质用人造沸石滤除，得过滤液。

b、热沉淀：由于SOD酶的耐热性在短时间内较强，将上述滤液放入68℃水浴锅中加热20min，并在室温下迅速冷却，将其他杂蛋白除去。

4.除去所用试剂残余量及弥补铜离子丢失。

由于经过权利2中要求的处理，尚存留试剂残余量，须除去，同时，为弥补SOD酶中的铜离子丢失，须补足。故最后按每100ml处理量用1.5倍的丁醇沉淀抽提得白色SOD酶后，将酶液再用10倍的去离子水溶化，每100ml加入该体积8％的氯化铜液1.2毫升，搅拌，使溶液微呈蓝色，然后现加入该体积1.5倍的丁醇再沉淀抽取一次，得到略呈微蓝白色的带铜离子的SOD酶(残留试剂杂质扩散于处理液中弃除)。用真空冷干燥之，即为含铜离子的微蓝白色SOD酶粉剂。

5.此技术原则上适用于对各种生物具有已知等电点蛋白的分离，包括各种酶、蛋白类激素、各种细胞蛋白包括免疫球蛋白、以及各种特异性蛋白的分离等等。