[发明专利]分离积雪草苷-B、羟基积雪草苷和积雪草苷的方法

说明书

技术领域

本发明涉及积雪草总苷中组分的分离，具体涉及一种分离积雪草苷 -B、羟基积雪草苷和积雪草苷的方法，属化工分离技术领域。

背景技术

积雪草Centella asiatica(L.)Urban，又名胡薄荷、地钱草等，为伞形 科积雪草属植物，广泛分布在南非、印度以及我国长江流域以南各地，是 一种传统中草药。据研究报道，积雪草具有消炎、增强记忆力、促进胶原 蛋白合成、抗抑郁和抗癌等多种生理活性。目前认为，积雪草的主要活性 成分为积雪草总苷，积雪草总苷是一种混合物，主要由三萜烷酸形成的糖 苷组成，包括积雪草苷-B(Asiaticoside B，CAS No.：125265-68-1)，羟基 积雪草苷(Madecassoside；Asiaticoside A，CAS No.：34540-22-2)和积雪草 苷(Asiaticoside，CAS No.：16830-15-2)，它们都具有五环三萜结构和糖苷 支链，仅在三萜环上的羟基数目和位置存在着差异。虽然它们的结构极其 相似，但生物活性却不尽相同，其中羟基积雪草苷具有消炎和治疗风湿性 关节炎等活性；积雪草苷能够促进伤口的愈合，对烧伤性瘢痕有明显的治 愈作用，常作为评价积雪草药理活性的标志性成分；由于积雪草苷-B纯 品难以获得，关于它的药理活性还未见报道。

鉴于积雪草总苷中各物质的结构及理化性质都较为接近，其中羟基积 雪草苷和积雪草苷-B是一对同分异构体，它们和积雪草苷相比只多了一 个羟基，而强极性糖元的连接又大大地弱化了这种微小极性的差异，使得 很难用常规的分离方法将这三种物质完全分离。

专利EP 867447，CN 1194154，US 6417349，IN 183285和CN 1387868A 报道了提取积雪草总苷的方法，但分离纯化这三种物质的方法却较少。杜 琪珍(Du Q Z，Jerz G，Chen P，et al..Journal of Liquid Chromatography& Related Technologies，2004，27(14)：2201-2215.)和Vanhaelen-Fastré(Diallo B，Vanhaelenfastre R，Vanhaelen M.Journal of Chromatography，1991， 558(2)：446-450.)等采用高速逆流色谱实现了积雪草苷和羟基积雪草苷的 分离，但该方法制备规模较小，所得产品质量只能达到毫克级，而且不能 分离羟基积雪草苷和积雪草苷-B。

专利US 2006/0106206A1报道了一种制取羟基积雪草苷的方法，但它 所获得的羟基积雪草苷的纯度只有81％，且回收率低，消耗大量溶剂，无 法实现工业化。公开号为CN 101182346A的中国专利申请报道了一种用 硅胶柱分离羟基积雪草苷和积雪草苷-B的方法，所得产品纯度只能在95％ 左右，且操作步骤比较繁琐。

模拟移动床色谱(Simulated moving bed chromatography，SMBC)具有 分离能力强，设备结构小，便于自动控制，并特别有利于分离热敏性高及 难以分离物系等优点，适用于进行连续性大规模工业化生产，它的引入能 够在保证分离纯度和收率的前提下大大提高生产的自动化水平和生产效 率，并且使得生产环境得到非常大的改善。90年代以来，SMBC技术开 始应用于精细化工和药物尤其是手性药物的分离。由于积雪草总苷中各成 分性质的复杂性和特殊性，目前尚未见到有关模拟移动床色谱分离纯化积 雪草总苷中各活性成分的报道。

发明内容

本发明提供了一种分离积雪草苷-B、羟基积雪草苷和积雪草苷的方 法，针对积雪草总苷中复杂的活性成分，采用模拟移动床色谱，结合合适 的流动相分离得到高纯度的积雪草苷-B、羟基积雪草苷和积雪草苷单体。

一种分离积雪草苷-B、羟基积雪草苷和积雪草苷的方法，包括步骤：

(1)将含积雪草总苷的原料溶于甲醇水溶液中配制原料液，将原料 液通入模拟移动床色谱系统，以甲醇水溶液为流动相进行洗脱，将提取液 蒸除溶剂后得到积雪草苷，提余液蒸除溶剂后得到一次固体料；

(2)将一次固体料溶于含乙腈和甲基叔丁基醚的水溶液中配制一次 料液，将一次料液通入模拟移动床色谱系统，以含乙腈和甲基叔丁基醚的 水溶液为流动相进行洗脱，将提取液蒸除溶剂后得到羟基积雪草苷，提余 液蒸除溶剂后得到二次固体料；