[发明专利]一种基于组合原理和PCR建立超大容量基因文库的新方法

权利要求书

1.一种基于组合原理和PCR建立超大容量基因文库的新方法。

步骤包括：

(a)设计随机的DNA或者RNA序列，序列的两端有共用接头序列。

(b)利用共用接头序列的互补，将随机序列在溶液中进行PCR重聚。

(c)在重聚过程中或重聚过程后加入包含(a)中接头序列的特异性引物控制重聚产物的长度。

(d)利用PCR手段用特异性引物对重聚产物进行扩增。

(e)对(b)或(c)或(d)的DNA或者RNA产物用不对称PCR得到单链分子后，直接进行筛选，得到与目标物质相识别和特异性结合的DNA分子或者RNA分子。

(f)对(b)或(c)或(d)的DNA产物进行片段回收，通过酶切、连接、转化等手段，筛选得到与目标物质相识别并特异性结合的蛋白质或有其它任何功能的蛋白质。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(a)中的DNA随机序列部分为NNN，或者NNY或者NNR。其中N为C，G，A，T四个碱基之一；Y为C或T两个碱基之一；R为A或G两个碱基之一。随机序列的个数为3-300个碱基。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(a)中的RNA序列，其随机序列部分为NNN，或者NNY或者NNR，其中N为C，G，A，U四个碱基之一；Y为C或U两个碱基之一；R为A或G两个碱基之一。随机序列的个数为3-300个碱基。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(a)中的DNA或者RNA随机序列两端的共用接头部分，其5’端与另一共用接头序列的3’端互补，3’端与另一共用接头序列的5’端互补。互补碱基的个数为6-30个。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(b)中的随机序列PCR重聚，随机序列之间由于接头序列的互补而重聚，重聚后的序列包含三段和三段以上的随机片段。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(b)中的随机序列PCR重聚，所有起始随机片段的总浓度在5ng/μL-200ng/μL。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：对步骤(b)或(c)产生的重聚片段，用PCR手段进行序列的扩增。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：对步骤(b)或(c)或(d)的DNA或者RNA产物，用不对称PCR得到单链分子后，直接进行与目标物质相识别和特异性结合的筛选，得到与目标物质相识别和特异性结合的DNA分子或者RNA分子。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：对步骤(b)或(c)或(d)的重聚DNA产物进行酶切、连接、转化等手段，进行与目标物质相识别和特异性结合的蛋白质或有其它任何功能的蛋白质的筛选。