[发明专利]反相高效液相色谱法分离多黏菌素E甲磺酸钠及其类似物

权利要求书

1.一种分离多黏菌素E甲磺酸钠及其异构体或类似物的高效液相分析方法，其特征是以烷基键合硅胶填充柱为固定相，以有机溶剂和水组成的混合溶剂为流动相，进行等度或梯度洗脱，用紫外检测器或蒸发光散射检测器进行检测。

2.如权利要求1所说高效液相色谱方法，其特征是利用烷基键合硅胶填充柱为固定相，优化条件为以已知的各类型商品化碳18烷基键合硅胶填料为固定相，优化的固定相填料粒径为1.5～10μm，更优为的optimapak碳18烷基键合硅胶填料。分析柱柱长为3～50cm，更为优化的柱长为15～25cm。

3.如权利要求1所说高效液相色谱方法，其特征是有机溶剂和酸的水溶液组成的混合溶剂，其中有机溶剂可以为：乙腈、甲醇、乙醇、异丙醇、正丙醇、四氢呋喃、丙酮，或上述两种及两种以上有机溶剂的混合物；酸可以为：盐酸、硫酸、磷酸、甲酸、乙酸、三氟乙酸、烷基磺酸、苯磺酸、取代苯磺酸、五氟丙酸、七氟丁酸、九氟戊酸、十一氟己酸、十三氟庚酸、十五氟辛酸或上述两种及两种以上酸的混合物。

4.如权利要求1所说高效液相色谱方法，其特征在于流动相所用水为脱盐水，流动相经0.45μm的滤膜过滤。所用高效液相色谱的操作条件为：色谱柱：optimapak碳18烷基键合硅胶填充柱[(150～250)×(2.1～4.6)mmi.d，2～10μm]，流速为：0.2～1.0ml/min，检测波长为：205～225nm，PH为1.0～10.0，温度为0～60℃。更优化为：色谱柱：optimapak碳18烷基键合硅胶填充柱[(150～250)×(2.1～4.6)]mmi.d，2～5μm)，流速为：0.8ml/min，检测波长为：214nm，PH为1.5～8，温度为常温。

5.如权利要求1所说高效液相色谱方法，其特征为梯度洗脱条件为：梯度变化时间为5～80分钟，混合溶剂组成的体积比为有机溶剂∶酸水溶液3∶97～80∶20；线性洗脱条件为有机溶剂∶酸水溶液15∶85～50∶50。混合溶剂中酸的质量浓度为0.01％～5％。更为优化的洗脱条件为：梯度变化时间为：10～20分钟，混合溶剂组成的体积比为乙腈∶三氟乙酸水溶液15∶85～60∶40，三氟乙酸的浓度为0.05％～1％。

6.如权利要求3所说高效液相色谱方法，其特征为在上述的混合溶剂中也可以添加表面活性剂，如二乙胺、三乙胺、季铵盐、磺酸盐等。