[发明专利]一种含双歧杆菌的组合物及其应用

权利要求书

1.一种含双歧杆菌的组合物，其特征在于所述组合物由经高密度培养和双层包埋的双歧杆菌、低聚糖、维生素、金属元素和辅料混合配制而成。

2.根据权利要求1所述的含双歧杆菌的组合物，其特征在于所述含双歧杆菌的组合物的组分，按重量百分比计：双歧杆菌为0.01～10％，低聚糖为10～50％，维生素为0.01～10％，金属元素为0.01～10％，其余为辅料。

3.根据权利要求1所述的含双歧杆菌的组合物，其特征在于所述双歧杆菌至少为婴儿双岐杆菌AS 1.2202、短双歧杆菌AS 1.2213、长双歧杆菌CICC 6186、两歧双歧杆菌CICC 6071、青春双歧杆菌CICC 6070中的一种。

4.根据权利要求1所述的含双歧杆菌的组合物，其特征在于所述低聚糖至少为低聚果糖、低聚半乳糖、大豆低聚糖、低聚木糖、低聚乳果糖、低聚异麦芽糖等中的一种。

5.根据权利要求1所述的含双歧杆菌的组合物，其特征在于所述维生素至少为维生素A、维生素B₁、B₂、B₆、B₁₂、维生素C、维生素D、维生素E中的一种。

6.根据权利要求1所述的含双歧杆菌的组合物，其特征在于所述金属元素至少为锌、铁、钙、镁中的一种。

7.根据权利要求1所述的含双歧杆菌的组合物，其特征在于所述辅料至少为麦芽糊精、乳糖、淀粉中的一种。

8.根据权利要求1所述的含双歧杆菌的组合物，其特征在于所述经高密度培养和双层包埋的双歧杆菌的制备方法为：

A、高密度培养

(1)菌种活化：无菌条件下，挑取安瓿管中菌体接种于液体培养基和琼脂平板上，在36～38℃条件下厌氧培养24～48小时，连续活化2～3代，即得活化菌种；

(2)种子培养：将活化菌种按5％～10％的接种量接入液体培养基中，在36～38℃条件下厌氧培养20～28小时，作为种子培养物；

(3)发酵培养：将种子培养物按5％～10％的接种量接入液体培养基中，在36～38℃条件下进行发酵罐高密度培养；

(4)发酵终止：培养基pH和葡萄糖含量均不再降低时终止发酵，获得双歧杆菌高密度发酵液；

B、双层包埋

(1)离心浓缩：将双歧杆菌高密度发酵液在4℃、6000～8000r/min的条件下离心10～20min，无菌水洗涤2～3次，取下层沉淀即为活性菌泥；

(2)添加保护剂：按1∶4～1∶10(V_保护剂/V_发酵液)的比例在活性菌泥中加入菌体冷冻干燥保护剂，无菌条件下150～250r/min搅拌15～30min至均匀，制备菌悬液；

(3)I层包埋：按1∶1～1∶5(V_{I层包埋液}/V_保护剂)的比例将I层包埋液加入菌悬液中，无菌条件下150～250r/min搅拌15～30min至均匀；

(4)II层包埋：按1∶1～1∶5(V_{II层包埋液}/V_保护剂)的比例将II层包埋液加入上述混合液中，无菌条件下150～250r/min搅拌15～30min至均匀；

C、冷冻干燥

将经双层包埋的双歧杆菌置于-70℃冰箱中预冻2～6h后，在冷阱温度-45～-55℃，真空度0.1～10帕下真空冷冻干燥，即得双歧杆菌菌粉。

9.根据权利要求8所述的含双歧杆菌的组合物，其特征在于双歧杆菌培养基的配制方法如下：

胰蛋白胨5.0g、酵母提取物10.0g、大豆蛋白胨5.0g、葡萄糖10.0g、L-半胱氨酸盐酸盐0.5g、吐温801.0mL、盐溶液40mL、加水定容至1000mL，调节pH6.8-7.0，121℃灭菌20min。其中盐溶液的成分为：氯化钙0.2g、磷酸二氢钾1.0g、硫酸镁0.48g、碳酸氢钠10.0g、磷酸氢二钾1.0g、氯化钠2.0g、加水定容至1000mL。

10.根据权利要求8所述的含双歧杆菌的组合物，其特征在于冷冻干燥保护剂的配制方法如下：

脱脂奶粉8～12g、蔗糖8～12g、谷氨酸钠0.5～1.5g、山梨醇0.5～1.5g，加水定容至100mL，加热搅拌使其溶解，然后115℃灭菌15min。