[发明专利]一种抗肿瘤蛋白及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种抗肿瘤蛋白RE26，其特征在于：其N末端封闭，肽链中含有SEQ ID NO：1所示的序列NGLEEEETLLLLFFPP和SEQ ID NO：2所示序列NGTEQE； 

所述蛋白来源于紫皱盖罗鳞伞（Rozites emodensis (Berk.) Moser）；

分子量为26kD，等电点为4.3；

经羟胺切割后得到24kD和17kD两条片段，24kD片段N段氨基酸序列如SEQ ID NO：1，17kD片段N端序列如SEQ ID NO：2所示；

所述蛋白由如下方法制备得到，其包括：

1）获得RE26粗提液：采取紫皱盖罗鳞伞（Rozites emodensis (Berk.) Moser）新鲜子实体，用蒸馏水洗净、沥干，加于一倍体积的pH 8.0的0.02mol/l Tris-HCl缓冲液，4℃匀浆并温和搅拌过夜，离心后，将上清过滤去悬浮物即获得RE26粗提液；

2）分离纯化步骤1）的RE26粗提液，获得RE26蛋白纯品；

所述步骤2）所述的分离纯化方法为离子交换层析，先用填料粒径为45-300μm阴离子或阳离子交换树脂对RE26粗提液进行粗分离，再用填料粒径为15-45μm的阴离子或阳离子交换树脂进一步分离得到RE26纯品。

2.根据权利要求1所述蛋白RE26，其特征是：所述蛋白可以特异识别并诱导肿瘤细胞凋亡，所述肿瘤细胞为淋巴瘤细胞。

3.制备如权利要求1或者2所述蛋白RE26的方法，包括：

1）获得RE26粗提液：采取紫皱盖罗鳞伞（Rozites emodensis (Berk.) Moser）新鲜子实体，用蒸馏水洗净、沥干，加于一倍体积的pH 8.0的0.02mol/l Tris-HCl缓冲液，4℃匀浆并温和搅拌过夜，离心后，将上清过滤去悬浮物即获得RE26粗提液；

2）分离纯化步骤1）的RE26粗提液，获得RE26蛋白纯品。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征是：步骤2）所述的分离纯化方法为离子交换层析，先用填料粒径为45-300μm阴离子或阳离子交换树脂对RE26粗提液进行粗分离，再用填料粒径为15-45μm的阴离子或阳离子交换树脂进一步分离得到RE26纯品。

5.权利要求1或者2所述蛋白RE26在制备治疗肿瘤的药物中的用途；所述的肿瘤为淋巴瘤。

6.权利要求1或者2所述蛋白RE26在制备诊断和研究肿瘤疾病的试剂中的用途；所述肿瘤疾病为淋巴瘤。