[发明专利]昆虫的栖息地的鉴定方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种用于通过DNA分析来鉴定同一种类的昆虫中的昆虫的栖息地的标记(Merkmal)的制作方法。

背景技术

日本是世界上最大的食物进口国。在这些食物中，除食品以外，还包含大豆等的食品原料、玉米等的饲料用谷物等。作为这些食物运送到日本的途径，从出口国向日本的运送途径可例举利用飞机的空运、利用船舶的海上运输、以及在出口国内的陆路运输。

可是，进口的食物在国内仓库内保管时，有时会出现害虫。作为其原因，可认为有保管仓库内栖息的昆虫混入的情况和在出口地或经由地栖息的昆虫混入的情况。追踪究竟是在哪一个途径上混入了害虫在采取安全措施上是非常重要的。但是由于昆虫的分布区域分散在世界各地，因此，同一形态的昆虫在各地栖息时，难以判断发生的害虫究竟是在何处混入，也即，难以从形态特征上判断该害虫的栖息地，从而也难以查明该害虫混入的原因。

发明内容

发明要解决的课题

本发明提供一种用于通过DNA分析来鉴定同一种类的昆虫中的昆虫的栖息地的标记(Merkmal)的制作方法。

如上所述，例如，将食物保管在港湾仓库期间发生了赤拟谷盗的情况下，目前的现状是还没有一种能够鉴定是在国内栖息的昆虫在港湾仓库混入食物还是在出口地或经由地栖息的昆虫混入食物的方法，所以强烈希望开发出能够鉴定害虫的混入场所的技术。

解决课题的方法

本发明人为了解决上述课题进行了锐意研究。在分析来自日本国内及世界各地的赤拟谷盗的来自线粒体的COI基因及ND5基因的碱基序列时，发现各碱基序列中存在栖息地所特有的多态性，从而完成了本发明。

即，本发明如下：

(1)一种方法，其是用于鉴定同一种类的昆虫中的昆虫的栖息地的标记(Merkmal)的制作方法，该方法包含下述工序：

(a)确定来自2个以上的栖息地的1种以上的昆虫的DNA碱基序列的工序；

(b)对上述工序(a)中确定的碱基序列进行比对的工序；

(c)根据上述工序(b)的比对结果，将供给比对的全部上述碱基序列中保守的1个或其以上的碱基形成的位点从上述碱基序列中去除的工序；

(d)根据上述工序(c)中的去除的结果，将剩余位点的全部或一部分作为类型识别位点的工序；

(e)对于上述工序(d)中得到的类型识别位点，比较相互对应的碱基，将完全一致的类型识别位点分类为同一类型，将不完全一致的类型识别位点分类为其他的1个以上的类型的分类工序；和

(f)对于上述工序(e)中分类的各个类型，由属于各类型的昆虫栖息地确定各类型的栖息地，从而将各类型的类型识别位点作为标记(Merkmal)的工序。

(2)一种方法，其特征在于，其是用于鉴定同一种类的昆虫中的昆虫的栖息地是否是某地区的地区识别标记(Merkmal)的制作方法，该方法在上述(1)中所述的工序的基础上进一步包含下述工序：

(g)对于(1)中所述的工序(f)中得到的标记(Merkmal)，比较相互对应的碱基，选取只在1个类型中存在而在该类型以外的类型中不存在的碱基的工序；和

(h)将上述工序(g)中选取的1个或其以上的碱基单独或多个组合后作为地区识别标记(Merkmal)的工序。

(3)根据(1)或(2)中所述的方法，其中，昆虫为属于鞘翅目的昆虫。

(4)根据(1)～(3)中任一项所述的方法，其中，昆虫为属于拟步甲科的昆虫。

(5)根据(1)～(4)中任一项所述的方法，其中，昆虫为赤拟谷盗。

(6)根据(1)～(5)中任一项所述的方法，其中，DNA为来自线粒体的DNA。

(7)根据(6)中所述的方法，其中，来自线粒体的DNA为COI基因和/或ND5基因。

(8)一种用于鉴定被测昆虫的栖息地的方法，该方法由下述步骤构成：

比较具有根据(1)～(7)中任一项所述的方法得到的标记(Merkmal)的区域的碱基序列、和从被测昆虫中得到的碱基序列中的与具有所述标记(Merkmal)的区域的碱基序列相对应的碱基序列，

分析被测体的所述碱基序列中的与标记(Merkmal)对应的位点的碱基是否与标记(Merkmal)的碱基一致，从而鉴定被测体的栖息地。

(9)一种用于鉴定被测昆虫的栖息地的方法，其包含下述步骤：