[发明专利]用于生产目的物质的禽细胞系

权利要求书

1.一种生产禽细胞系的方法，其特征在于它包括以下步骤：

a)在含有下述成份的培养基中培养禽胚胎干细胞

-至少一种选自SCF、IGF-1或bFGF的生长因子和至少一 种选自LIF、IL-11、IL-6、IL-6R、CNTF、制瘤素或促心激素的细胞因 子；

-钝化的STO细胞的饲养菌苔；

-浓度为12-8％的胎牛血清；

b)在至少大约二十次传代后，

-通过逐步撤消所述生长因子和所述细胞因子而改变该培 养基；

c)建立能在不含外源生长因子和细胞因子的基础培养基中增殖 的黏附性或非黏附性细胞系。

2.根据权利要求1所述的方法，其中步骤b)还包括将胎牛血清 的浓度降低至2％的低浓度，并且其中所述细胞系能够在不含外源生长 因子和细胞因子、以及含有2％低浓度血清的基础培养基中增殖。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，在步骤b)中

-通过逐步撤消所述生长因子和所述细胞因子，和

-通过逐步撤消钝化的饲养菌苔而改变该培养基；

和

在步骤c)中建立能在不含生长因子、细胞因子和钝化的饲养菌苔 的基础培养基中增殖的黏附性或非黏附性细胞系。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述细胞系能够在体外在不 含外源生长因子的基础培养基中增殖至少50天；

其特征在于，以增殖状态和未分化的状态，其特征在于，所述细 胞系具有至少一种以下的特征：

-高的核质比，

-内源性碱性磷酸酶活性，

-内源性端粒酶活性，

-与选自抗体SSEA-1或EMA-1的特定抗体的反应性。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述细胞系具有以下 特征：

-高的核质比，

-内源性端粒酶活性，

-与选自抗体SSEA-1或EMA-1的特定抗体的反应性。

6.根据权利要求5所述的方法，其中所述细胞系还具有内源性碱 性磷酸酶活性。

7.根据权利要求1所述的方法，其中所述禽细胞系能够在不含外 源生长因子和细胞因子的基础培养基的体外培养中无限增殖。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述禽细胞系复制活 的或减毒病毒。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述禽细胞系复制活 的或减毒病毒，所述病毒选自：腺病毒、嗜肝DNA病毒、疱疹病毒、 正粘病毒、乳头多瘤空泡病毒、副粘病毒、小RNA病毒、痘病毒、呼 肠孤病毒或逆转录病毒的病毒。

10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述禽细胞系复 制活的或减毒病毒，所述病毒选自禽痘病毒家族。

11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于所述禽痘病毒家族 选自鸡痘病毒、灯芯草雀痘病毒、八哥痘病毒、鸽痘病毒、鹦鹉痘病 毒、鹌鹑痘病毒、麻雀痘病毒、欧椋鸟痘病毒和火鸡痘病毒。

12.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述禽细胞系复 制活的或减毒病毒，所述病毒选自正粘病毒家族。

13.根据权利要求12所述的方法，其特征在于所述正粘病毒家族 是流感病毒。

14.根据权利要求13所述的方法，其中所述流感病毒选自流感病 毒A、流感病毒B和流感病毒C。

15.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述禽细胞系复 制活的或减毒病毒，所述病毒选自副粘病毒家族。

16.根据权利要求15所述的方法，其中所述副粘病毒家族选自麻 疹病毒、腮腺炎病毒、风疹病毒、呼吸道病毒和肺病毒。

17.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述培养的细胞 是通过悬浮细胞获得的细胞，该悬浮细胞从受精卵的胚层盘中获得。

18.根据权利要求1所述的方法获得的细胞系在生产用于人类或 动物的活的、减毒的或灭活的疫苗中的用途。