[发明专利]一种利用拮抗微生物菌剂修复沙门氏菌污染土壤的方法

权利要求书

1.一种利用拮抗微生物菌剂原位修复沙门氏菌污染土壤的微生物生态学方法，其特征在于方法步骤为：

a.利用无菌滤纸片平板法从被沙门氏菌污染的土壤中分离得到适宜于土壤环境、对沙门氏菌有抑制或杀灭作用的拮抗细菌；

b.拮抗微生物菌株经过如下流程进行发酵：种子液接种→一级培养→二级培养接种→二级扩大培养，得到拮抗细菌菌液；

c.拮抗细菌菌液喷施于沙门氏菌污染土壤，喷施后耙匀。

2.根据权利要求1所述的沙门氏菌污染土壤拮抗微生物原位修复方法，其特征在于方法步骤为：

a.在LB细菌培养基平板上，首先均匀涂布病原菌接种液，然后用灭过菌圆形滤纸片分别蘸取目标拮抗细菌培养液，贴在涂过病原菌的平板上，于培养箱中28℃条件下培养1-3天，挑选具有明显抑菌圈菌株，对该菌进行记录，保存；

b.拮抗微生物复合菌剂制备：用无菌接种环将斜面保存菌种，接种至三角瓶无菌液体培养基中摇匀即成菌悬液，30℃，200r/min培养24h，培养得到一级种子液；将一级种子液按其与发酵培养基体积比1∶10的接种量接种到发酵瓶中二级扩大培养48h得到发酵液；

c.利用微生物复合菌剂对沙门氏菌污染土壤进行微生物修复，分对照和添加拮抗微生物复合菌剂2个处理布置土培试验，置于自然条件下培养，添加拮抗微生物复合菌剂处理和对照均设4个重复，定期采取土样测定土壤中沙门氏菌存活数量，监测污染土壤中沙门氏菌的数量动态变化；

d.根据温室土培微生物菌剂修复效果，应用微生物修复方法于田间沙门氏菌污染土壤进行拮抗微生物复合菌剂微生物原位修复，将发酵培养拮抗微生物菌液施加到沙门氏菌污染田间土壤中，每个对照和处理设3个重复，于施加拮抗微生物复合菌剂后定期采集污染土壤0-10cm表层土样，采用五点采样法，监测污染土壤中的沙门氏菌的数量动态变化，以监测是否达到治理沙门氏菌污染土壤的效果。