[发明专利]一种氯霉素的光激化学发光免疫分析试剂盒及其检测方法

权利要求书

1、一种氯霉素CAP的光激化学发光免疫分析试剂盒，其特征是由(1)白色不透明微孔板，(2)CAP标准品，(3)包被有CAP-OVA的发光微粒，(4)兔抗CAP的抗体冻干品，(5)生物素化羊抗兔抗体冻干品和(6)包被有链霉亲和素的感光微粒六件物品组成。

2、根据权利要求1所述的试剂盒，其特征是包被有CAP-OVA的发光微粒(3)的制备：在离心管中加入1mg发光微粒，加入12.5μL 1％Tween-20，0.05mgCAP-OVA人工抗原，10μL硼氢化氰钠，用0.1M、pH 6.0的2-(N-吗啉)乙磺酸缓冲液将体积补充到200μL，37℃避光振荡反应48小时，加入10μL 0.3M、pH5.0的羧甲氧基胺半盐酸盐溶液封闭未结合位点，37℃避光孵育1小时，离心纯化，洗去未反应的试剂后，分离得到包被有CAP-OVA的发光微粒，稀释后备用。

3、根据权利要求1所述的试剂盒，其特征是CAP标准品(2)，从CAP纯品中稀释得到，稀释液为含有质量浓度10％甲醇的0.05mmol/L、pH 7.4的PBS，CAP标准品的CAP浓度分别为：0ng/mL，0.02ng/mL，0.1ng/mL，1ng/mL，10ng/mL，25ng/mL。

4、一种用权利要求1所述的试剂盒检测CAP的方法，其特征是顺次向白色不透明微孔板中加入包被有CAP-OVA的发光微粒，CAP标准品或处理好的被测样品，兔抗CAP抗体及生物素化羊抗兔抗体进行免疫反应；接着加入包被有链霉亲和素的感光微粒进行反应后检测光信号，以加入CAP标准品的检测值绘制标准曲线，以加入被测样品的检测值从标准曲线计算被测样品中的CAP含量。

5、根据权利要求4所述的检测CAP的方法，其特征是操作为：取包被有CAP-OVA的发光微粒，CAP标准品或处理好的被测样品、一定浓度的兔抗CAP抗体和生物素化羊抗兔抗体共四种试剂各20μL加到白色不透明微孔板，37℃孵育20分钟；加入175μL包被有链霉亲和素的感光微粒，37℃孵育10分钟；在光激化学发光检测仪上检测光信号，从标准曲线计算出被测样品中的CAP含量。

6、根据权利要求4或5所述的检测CAP的方法，其特征是样品处理：

蜂蜜样品处理：2g样品与4mL蒸馏水充分混合，加入4mL乙酸乙酯，加塞震荡10min，3000g离心10min；取2mL上清到干净玻璃管，50℃温和氮流蒸干，残留物充分溶解于1mL稀释标准品用的稀释液待测；

鸡蛋样品处理：3g样品均质后，加入6mL乙酸乙酯，震荡10min，3000g离心10min；取2mL上清液到干净玻璃管，50℃温和氮流蒸干，用1mL正己烷溶解干燥的残留物，加入1mL稀释标准品用的稀释液充分混合，3000g离心10min；吸取下层水相用于检测；

牛奶样品处理：5mL牛奶样品，2000rpm离心15min，取2.5mL下层脱脂奶与5mL乙酸乙酯充分混合，震荡10min，再静置5～10min转移4mL上层溶液到干净玻璃管中，温和氮流蒸干；残留物溶解于200μL稀释标准品用的稀释液，待测。