[发明专利]一种淫羊藿苷元的制备方法

说明书

技术领域：

本发明属于天然药物领域，涉及淫羊藿苷元的制备方法。

背景技术：

淫羊藿始载于《神农本草经》，具有补肾壮阳、祛风除湿、强筋健骨等作用，临床上用 于治疗多种原因所致的骨质疏松症。实验表明淫羊藿黄酮组分是其抗骨质疏松的有效部位， 其中有效成分淫羊藿苷元作用最为明显，在体外具有促进成骨细胞活性，抑制破骨细胞活性 的作用，因此制备淫羊藿苷元对研制抗骨质疏松新药有巨大的价值。

淫羊藿苷元，全称3，5，7-三羟基-4′-甲氧基-8-异戊烯基黄酮，又名淫羊藿素，英文名 为Icaritin，是一类多羟基黄酮类化合物，具有抗骨质疏松、抗氧化及激素样生物活性。其结 构式如下：

淫羊藿黄酮类成分在植物淫羊藿中多以苷类化合物形式存在，而淫羊藿苷元在原植物中 含量很低，难以直接分离纯化得到，因此可以通过水解淫羊藿黄酮苷类化合物中糖苷键的方 法制备淫羊藿苷元。已报道的水解糖苷键的方法有：(1)化学方法，如酸、碱水解法。酸水 解法多用盐酸、硫酸或硝酸，碱水解法多用氢氧化钠或氢氧化钾。此法多采用水解淫羊藿苷 3-鼠李糖糖苷键和7-葡萄糖糖苷键从而获得淫羊藿苷元，这些研究以淫羊藿苷为反应底物， 由于淫羊藿苷本身成本较高，其制备方法难以推广，且化学方法反应条件剧烈，容易破坏产 物，往往得不到完整的苷元，另外化学方法对环境污染大，不适合工业化大生产。(公开号： CN 101200743A水合淫羊藿素的制备方法；公开号：CN 1919191A环淫羊藿苷元作为制备防 治器官移植排斥反应药物的应用；公开号：CN 101316573A一种含有淫羊藿苷的水解产物 的化妆品组合物)。(2)生物转化法，如以淫羊藿为细菌、霉菌、酵母菌的发酵产酶诱导物， 制备含霉菌液，再用此菌液将淫羊藿黄酮苷类化合物转化为低糖苷或苷元(公开号：CN 1473938A酶法水解淫羊藿甙糖基制备低糖淫羊藿甙或甙元的方法)，由于淫羊藿黄酮苷类化 合物种类很多，其糖苷键结构十分复杂，主要由α-L-鼠李糖糖苷键、β-D-葡萄糖糖苷键、 β-D-木糖糖苷键等单糖糖苷键以及由他们组成的二糖糖苷键构成，加上酶催化水解的高度专 一性，这些含酶菌液无法彻底将糖苷键脱去，因此无法得到纯度较高的淫羊藿苷元。另外， 此法操作复杂，耗时多，目的性不强，多得到低糖苷，难以得到苷元，且转化率低，分离纯 化难，不利于工业化生产。

蜗牛酶是从蜗牛的嗉囊和消化道中提取的一种很有价值的混合酶，目前已明确其含有纤 维素酶、果胶酶、淀粉酶、蛋白酶等20多种酶，具有很强的生物转化能力，已广泛用于饲料 加工业、食品加工业以及细胞生物学和基因工程学的研究。针对淫羊藿黄酮苷类化合物中糖 苷键的复杂性，以及蜗牛酶的特殊性，本发明成功地将蜗牛酶应用于水解糖苷键制备淫羊藿 苷元，利用蜗牛酶的强酶解力，可直接将淫羊藿黄酮苷类化合物转化为苷元，简化了操作步 骤，此方法具有目地性强、转化率高、无污染、可大规模生产的优点。目前未见用蜗牛酶制 备淫羊藿苷元的报道。

发明内容

本发明提供了一种淫羊藿苷元的制备方法。

本发明技术方案如下：

一种淫羊藿苷元的制备方法，其特征是它包括下列步骤：

步骤1、将干燥的淫羊藿粉碎或切段，加入浓度为30-95％的乙醇或30-100％甲醇回流提 取，提取液减压浓缩得膏状物；

步骤2、在步骤1所得的膏状物以每克加入10-100毫升的比例加入pH＝3.5-9.0的醋酸- 醋酸钠缓冲液，按酶/膏状物＝0.05～5的质量比加入蜗牛酶进行水解，反应的温度为15-80℃， 反应时间为2-72h；

步骤3、将反应液离心，取沉淀用有机溶剂溶解，过滤取滤液，蒸去溶剂，即得淫羊藿 苷元粗品。

上述的制备方法，步骤1中所述的回流提取可以是两次回流提取，第一次加入8-20倍淫 羊藿质量的溶剂回流提取，第二次加入6-15倍淫羊藿质量的溶剂回流提取，合并两次提取液， 减压浓缩。

上述的制备方法，步骤2中所述的醋酸-醋酸钠缓冲液，可用Tris-HCl缓冲液、醋酸-醋 酸钾缓冲液、醋酸-醋酸铵缓冲液、磷酸-三乙胺或磷酸盐缓冲液代替。

上述的制备方法，步骤3中所述的有机溶剂可以是乙醇、甲醇、乙酸乙酯、丙酮、二氯 甲烷或氯仿。