[发明专利]狗鱼幼鱼弹状病毒实时荧光RT-PCR检测法和试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及病毒的检测方法和检测试剂盒，特别是涉及狗鱼幼鱼弹状病毒实时荧光RT-PCR检测法和试剂盒。

背景技术

根据国际病毒学分类委员会(International comittee on taxonomy ofviruses，ICTV)第8次报告，弹状病毒科(Rhabdoviridae)分为6个属，包括感染植物的质型弹状病毒属(Cytorhabdovirus)和核型弹状病毒属(Nucleorhabdovirus)，以及感染脊椎动物的水疱性口膜炎病毒属(Vesiculovirus)、狂犬病毒属(Lyssavirus)、短暂热病毒属(Ephemerovirus)和粒外弹状病毒属(也称非毒粒蛋白弹状病毒属)(Novirhabdovirus)，还有部分弹状病毒尚未分类，如Sigma virus，Flanders virus等。迄今报道感染鱼类的弹状病毒已有十几种，包括传染性造血器官坏死病毒(Infetioushematopoietic necrosis virus，IHNV)、病毒性出血性败血症病毒(Viralhaemorrhagic septicemia virus，VHSV)、牙鲆弹状病毒(Hirame rhabdovirus，HRV)、蛇头鱼弹状病毒(Snakehead rhabdovirus，SHRV)、鲤春病毒血症病毒(Spring viraemia of carp virus，SVCV)、狗鱼幼鱼弹状病毒(Pike fryrhabdovirus，PFRV)、弹状病毒903/87(Rhabdovirus 903/87，903/87)、鳜鱼弹状病毒(Siniperca chuatsi rhabdovirus，SCRV)、胭脂鱼弹状病毒(Chinesesucker rhabdovirus)及海鲑弹状病毒28/97(Sea trout rhabdovirus 28/97，STRV)等(Granoff and Webster，1999；张奇亚和李正秋，1999；Zhang et al.，2000；Johansson et al.，2001，2002)。在ICTV第6次报告上，SVCV，PFRV被列为水疱性口膜炎病毒属暂定种(Wunner et al.，1995)。在ICTV第7次报告中，正式把IHNV、VHSV、HRV、SHRV列为粒外弹状病毒属，SVCV、PFRV等仍归为水疱性口膜炎病毒属的暂定种(Walker et al.，2000)。其他鱼类弹状病毒的分类地位尚未确定。

随着鱼类养殖业的快速发展，鱼类病毒病已成为养殖鱼类的最大病害。由于缺乏有效的治疗方法，鱼类病毒性疾病的控制以预防为主，因而病毒的诊断与检测技术研究成了鱼类病毒研究中非常活跃的领域。鱼类弹状病毒有很强的致病性，特别是VHSV、IHNV、HRV、SHRV和SVCV在世界各地广泛流行，给水产养殖业造成重大的经济损失。因而这些病毒的流行病学备受科研工作者的关注。

狗鱼幼鱼弹状病毒(PFRV)是一种与鲤春病毒血症病毒(SVCV)同源性很高的病毒，目前还未引起人们高度重视。PFRV主要在欧洲狗鱼幼鱼中流行(Wolf，1988)。1972年该病毒在荷兰感染狗鱼幼鱼，引起大规模死亡，第一株PFRV从此批患病的狗鱼幼鱼中分离出来(De Kinkelin，1973)。PFRV与SVCV亲缘关系最近，G蛋白的同源性＞70％。对PFRV、SVCV及与它们血清学相关的鱼类弹状病毒G蛋白部分核苷酸序列进行系统进化分析，结果显示它们形成4个基因型，PFRV和SVCV分别形成一个基因型，分别为基因型III和I，其他病毒形成基因型II和IV(Stone et al.，2003)。SVC主要感染鲤科鱼类，被世界动物卫生组织列为必须申报的疾病，中国农业部将SVC列为二级动物疫病。随着对SVC的日益重视，对SVCV监控力度的加大，这些与SVCV亲缘关系高的病毒也将会越来越引起人们的重视。因而寻找特异、灵敏快速的检测方法，对于防控疾病的发生和发展十分关键。