[发明专利]同时检测乙型肝炎病毒三种核苷酸类似物耐药位点的方法及其试剂盒

权利要求书

1.一种在检测乙型肝炎病毒三种核苷酸类似物耐药位点中用于PCR反应扩 增的地高辛标记的引物，其特征在于：

外引物是：

HBV 570F  5’-TGTTGCTGTACAAAACCT-3’SEQ NO 1

HBV 1180R  5’-TCAGCAAACACTTGGCA-3’SEQ NO 2

内引物是：

HBV 610F  5’-TGTATTCCCATCCCATCATC-3’SEQ NO 3

HBV 998R  5’-CCCARAAGMCCCACAATTC-3’SEQ NO 4。

2.如权利要求1所述的在检测乙型肝炎病毒三种核苷酸类似物耐药位点 中用于PCR反应扩增的地高辛标记的引物，其特征是地高辛的标记数是5’端3 个。

3.一种同时检测乙型肝炎病毒三种核苷酸类似物耐药位点的分子试剂盒， 其特征是包括(1)用于PCR反应扩增的地高辛标记的引物，序列是SEQ NO 1～4； (2)杂交反应试剂包括预杂交液：6×SSC、0.5％SDS和100μG/ML鲑精DNA，杂交 液：6×SSC、0.5％SDS、100μG/ML鲑精DNA和摩尔浓度是3M的四甲基氯化铵，洗 脱液1：2×SSC、0.1％SDS，洗脱液2：0.5×SSC、0.1％SDS，洗脱液3：马来酸和 氯化钠，封闭液：0.2％脱脂奶粉和0.1％SDS，偶联碱性磷酸酶的地高辛抗体、显 色缓冲液：0.1M Tris、0.1M NaCl，pH9.5的显色缓冲液，显色液：NBT/BCIP； (3)杂交用膜条和标准对照品，膜条上点有扩增控制探针SEQ NO 5、显色控制 探针SEQ NO 3及27条针对相应10个耐药位点的特异性探针SEQ NO 6～32。