[发明专利]用于治疗和预防青光眼的疫苗滴眼液及制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种疫苗，特别涉及一种用于治疗和预防青光眼的疫苗滴眼液及制备方法。

背景技术

青光眼是世界上第二大致盲性疾病，可引起不可逆的视网膜神经节细胞(Retinal ganglion cells RGCs)凋亡和视神经萎缩，最终导致失明。视神经损伤也是临床常见的外伤类型和致盲原因，其它眼部多种疾病如：视神经炎，缺血性视神经病变、视网膜血管阻塞、视网膜变性性疾病均可累及视神经导致视神经萎缩最终失明。目前青光眼的主要治疗手段是用药物或手术降低眼压；然而，即使去除高眼压等诱因，视网膜神经节细胞的丢失和视神经萎缩仍然继续，常规的降眼压治疗无法阻止或预防这种继发性的损害。研究发现，高眼压和视神经损伤后神经元缺乏轴突远端及神经元局部营养因子的支持导致视网膜神经节细胞的进行性丢失及其神经纤维的变性。大量的研究证实给予外源性的神经营养因子如脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor，BDNF)，胶质细胞源性神经营养因子(glialcelline-derived neurotrophic factor，GDNF)睫状神经营养因子(ciliary neurotrophic factor，CNTF)可有效的促进损伤后视网膜节细胞的存活和轴突生长，但时间较短。通过眼内注射的方法易引起眼部感染，对青光眼及其它视网膜变性性疾病不是终生用药的途径。

Bakalash(2003)应用感光细胞间维生素A类结合蛋白(interphotoreceptorretinoid-binding protein，IRBP)对高眼压大鼠进行眼内接种后发现，视网膜神经节细胞的高眼压性损伤得到遏制。故Bakalash认为，对于神经变性损伤而言，损伤部位内源性抗原激活特异性T淋巴细胞介导的神经免疫保护是有效的治疗策略。

研究发现，视网膜神经节细胞受损后存活或再生困难的一个主要原因是由于髓磷脂蛋白的存在，抑制因子Nogo是其中重要成员之一，Nogo在正常中枢神经系统(central nervous system，CNS)、视神经及视网膜少量表达。中枢神经受损后Nogo因子释放增加、表达增强，不仅抑制神经纤维再生，而且可启动神经元凋亡过程，导致神经元死亡。Schwab等制备出Nogo的单克隆抗体IN-1，并进行大量在体试验，证实IN-1可促进脊髓和脑损伤后轴突长距离的再生长。Liebscher等切断2-6周龄大鼠皮质脊髓束后将IN-1单抗杂交瘤细胞移入脑内，在损伤处见到神经轴突明显的侧向发芽生长。Hauben等用髓磷脂抗原或被动转移髓磷脂活化T细胞均可减少外伤性脊髓和视神经损伤引起的神经退化，并提高功能恢复。众多研究表明，主动免疫或被动免疫阻遏Nogo或髓磷脂均能够促进CNS再生。视神经是CNS的一部分，相同的手段是否也能促进视神经损伤后的再生呢？

Nogo有66个氨基酸残基在胞膜外形成拓扑结构，即Nogo66，是Nogo的活性区域，介导了Nogo的神经抑制活性。我们在前期利用基因重组技术原核表达和纯化了Nogo66蛋白，并制备成Nogo66福氏佐剂疫苗，接种于慢性高眼压大鼠四肢躯干皮下，可诱导大鼠机体产生特异性IgG抗体和T淋巴细胞增殖，并证实对慢性高眼压大鼠RGCs的数量和功能有一定保护作用。

青光眼是一种需要终身治疗的疾病，而Nogo66蛋白疫苗通过传统途径接种后产生的免疫效应持续时间较短，需要不断加强免疫才能维持一定的抗体滴度和活化T细胞数量，患者必须经常到医院就诊接受皮下注射接种疫苗，对于行动不便或边远地区的患者，以及不太理解注射疫苗意义的患者，很难做到按时到医院就诊，难以维持有效的免疫效应，不能达到应有的治疗效果。另外，Nogo66是一个分子量为7.53461kD的小分子蛋白，小剂量皮下接种很难完全激活机体免疫系统，在眼球视网膜这样的免疫特赦器官获得较好的免疫效应。如果增加剂量，则有致实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmuneencephalomyelitis，EAE)的风险。因此，通过眼局部结膜淋巴途径或角膜途径直接接种，可减少疫苗中蛋白的使用剂量，提高局部免疫能力，并且患者可以将疫苗拿回家，按照医嘱自行点眼接种，使用方便等优点。不仅可治疗青光眼，主动保护受损的RGCs，减少其凋亡，增加其数量，对青光眼的进一步发展也起到预防的作用。

发明内容