[发明专利]一种链霉亲和素预包被酶标板的制备方法与应用

说明书

技术领域

本发明属于体外免疫检测技术领域，特别涉及一种链霉亲和素预包被酶标板及其制备方法与应用。

背景技术

链霉亲和素(streptavidin)是由链霉菌streptomyces分泌的一种碱性糖蛋白，易于与聚苯乙烯塑料微孔板结合。一个链霉亲和素分子能结合4个生物素分子，二者亲和常数(K)为10¹⁵L/mol。由于生物素与亲和素有极高的结合力，生物素-亲合素系统(biotin-avidin system，BAS)已被广泛应用于酶联免疫检测中。

将链霉亲和素固定到固相载体上，利用BAS固定难包被的小分子抗原抗体或核酸的方法已得到广泛应用。链霉亲和素预包被酶标板在酶联免疫、PCR-ELISA等领域均有应用。BAS固定作用的广泛应用取决于链霉亲和素固相包被的良好效果。

目前报道的链霉亲和素包被为通过常规的湿法包被方法实现。湿法包被方法通过调节链霉亲和素的浓度和包被缓冲液优化包被效果，其过程繁琐，所需时间长，孔间差、批间差较大，稳定性差，生物素结合力低，包被的链霉亲和素固定不稳定，洗板过程易洗去。而且，湿法包被方法对酶标板的吸附力要求高，包被结束后要甩掉大部分包被液，链霉亲和素的利用率低，成本高。干法包被方法由于会影响抗原抗体等的活性和空间结构，因此在酶联免疫包被中应用很少。至今为止，尚未有干法包被方法制备的链霉亲和素预包被酶标板的报道。

发明内容

本发明的首要目的在于克服目前常规的湿法包被制备链霉亲和素预包被酶标板的不足之处，提供一种链霉亲和素预包被酶标板的制备方法。

本发明的另一目的在于提供由所述制备方法制备的链霉亲和素预包被酶标板。

本发明的再一目的在于提供所述链霉亲和素预包被酶标板的应用。

本发明的目的通过下述技术方案实现：一种链霉亲和素预包被酶标板的制备方法，包括以下步骤：

用pH9.0～9.8、0.01～0.07mol/L的碳酸盐缓冲液或pH4.5～5.5、0.1～0.2mol/L的柠檬酸磷酸盐缓冲液溶解链霉亲和素，链霉亲和素的浓度为1.0～6.0μg/ml，得到包被缓冲液；将包被缓冲液加入空白酶标板中，每孔100～250μl；之后置于32～40℃烘干，得到链霉亲和素预包被酶标板。

所述的碳酸盐缓冲液优选为碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液；

所述的柠檬酸盐缓冲液优选为柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液；

所述链霉亲和素预包被酶标板优选在烘干后置于封口袋中于2～5℃下保存；

所述链霉亲和素预包被酶标板中的链霉亲和素结合稳定，与生物素结合力强；

所述链霉亲和素预包被酶标板应用于体外免疫检测技术领域，也可用于分子生物学中核酸检测领域；

所述链霉亲和素预包被酶标板的应用，包含以下步骤：先用PBST缓冲液清洗所述链霉亲和素预包被酶标板至少5次，每次1分钟，每次清洗后甩掉拍干，除去未结合的链霉亲和素，加入待测物质进行酶联免疫吸附分析即可；所述PBST缓冲液为含有Tween 20的PBS缓冲液，其中Tween 20浓度为体积百分比0.05％；

所述PBS缓冲液优选为pH值为7.4、浓度为0.01mol/L的PBS缓冲液；

本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：

(1)本发明中链霉亲和素预包被酶标板的制备方法简单，链霉亲和素利用率高，从而降低了链霉亲和素的用量(现有技术的链霉亲和素包被液浓度需要10μg/ml，而干法在2μg/ml时可达到相比湿法更优的包被效果)。

(2)通过本发明所述的制备方法得到的链霉亲和素预包被酶标板批次稳定，即固相载体-酶标板结合的链霉亲和素的量较为均匀。另外，所述的链霉亲和素预包被酶标板的孔间差、批间差及稳定性均高于湿法包被，更适合长期保存。

(3)本发明制备的链霉亲和素预包被酶标板链霉亲和素结合稳定，PBST缓冲液冲洗20次生物素结合量变化不显著，性能优良。链霉亲和素预包被酶标板对于生物素的结合量的测定数据能反映包被的质量，酶标板的生物素结合量越大，说明链霉亲和素预包被酶标板的包被效果越优越。本实验中洁特高亲和力板干法包被的最大生物素结合浓度为10ng/ml(见图1)，即每孔可结合1ng生物素(4.1pmol/孔)。而同样的方法测得的国产预包被板生物素结合量只有0.2ng(0.8pmol/孔)，显示本实验的包被效果优于国产预包被板。