[发明专利]水蛭素的生理盐水-聚乙二醇双水相提取法

说明书

技术领域

本发明属医药制剂技术领域，涉及一种水蛭素的提取技术，特别是以菲牛蛭水解血为原材料的水蛭素提取技术。

背景技术

世界卫生组织统计数据表明，心脑血管疾病是当今危害人类健康的主要疾病。血栓是导致心脑血管疾病发生的主要原因，而凝血酶是导致血栓形成的主要因素。水蛭素是迄今发现的最强的凝血酶特异性抑制剂，能与凝血酶特异性结合使之丧失凝血活力。目前，水蛭素主要以菲牛蛭、欧洲医用水蛭、印度水蛭、亚马逊巨型水蛭等为原材料提取。临床试验表明，水蛭蛭素既能使血栓融化从而消除或缓解病情，也能防止血栓形成，具有极好的预防和治疗血栓性心脑血管疾病的效果。现存的水蛭素类药物剂型主要为注射剂和口服片剂。

目前，国内外提取水蛭素的方法有多种。例如1970年Markwardt采用的乙醇分级沉淀、阳离子交换、凝胶过滤以及阴离子交换等步骤获得水蛭素。中国专利<申请号>92107076<发明名称>医用天然水蛭素的提取方法，是将水蛭捣碎成浆状，加热，用冰醋酸调pH值，冷却至室温，用Na₂CO₃溶液调pH值，离心收集滤液，沉淀用生理盐水浸提2～3次，离心收集液滤。合并全部液滤，透析，透析液用95％以上的乙醇沉淀，静置，收集沉淀，低温干燥得到水蛭素。水蛭素可以用于生产口服片剂或口服液。这些工艺的不足之处是提取步骤多，过程复杂，周期长。

为了提高水蛭资源的利用率，近年已有人利用水蛭水解血为原材料提取水蛭素。水蛭水解血是让水蛭充分吸取动物血数分钟后，用物理或化学的方法使血液从水蛭体内流出的橙红色的液体。

发明内容

本发明的目的是提供一种水蛭素的生理盐水-聚乙二醇双水相提取法，以菲牛蛭水解血为原材料，提高水蛭资源的利用率。

本发明包括原材料处理、水蛭素粗品提取及水蛭素粗品纯化等步骤，将原材料处理后，加入生理盐水搅拌，离心得水相和沉淀；取水相备用，沉淀用组织捣碎机捣成浆状，加生理盐水搅拌，离心得水相和沉淀；取水相备用，沉淀再用组织捣碎机捣成浆状后，用生理盐水重复处理一次；离心，去沉淀取水相；合并3次的水相，得水蛭素粗品提取液；水蛭素粗品提取液加入硫酸钠使浓度为0.04～0.06mol·L^-1，加入聚乙二醇6000使质量浓度为28～30％，搅拌，离心分离，取上相水溶液，加入无水乙醇搅拌均匀，冷藏过夜，离心取沉淀称重后溶解于生理盐水中；加入无水乙醇搅拌均匀，冷藏过夜，离心取沉淀，冷冻干燥得到水蛭素。

所述的原材料处理是，将菲牛蛭水解血边搅拌边加热至全部凝固后取出，迅速冷却至室温，于组织捣碎机中以10000～12000r/min处理1.5～2分钟捣成浆状。

所述的水蛭素粗品提取是，将预处理过的浆状原材料加入2～2.5倍重量的生理盐水搅拌2.5～3小时，离心取水相，沉淀用组织捣碎机10000～12000r/min处理1.5～2分钟捣成浆状，按浆状原材料的量加入1.5～2倍生理盐水，240～300r/min搅拌2～2.5小时，离心取水相，沉淀再用组织捣碎机10000～12000r/min处理1.5～2分钟捣成浆状，按浆状原材料的量加入1～1.5倍生理盐水搅拌2～2.5小时，离心去沉淀，取水相，合并3次的水相，此即为水蛭素粗品水溶液。

所述的水蛭素纯化是在水蛭素粗品水溶液中加入硫酸钠使浓度为0.04～0.06mol·L^-1，加入聚乙二醇6000使质量浓度为28～30％，240～300r/min搅拌30分钟，离心分离形成上、下相，取上相水溶液，加入2.8～3倍无水乙醇搅拌均匀，冷藏过夜，离心，取沉淀，冷冻干燥得到水蛭素。

关键试剂优选的使用浓度为：硫酸钠0.05mol·L^-1、聚乙二醇6000质量浓度为29％。

与现有的技术相比，本发明的突出的优点和显著的进步是：

1、本发明由于没有层析的操作步骤，所以过程简单，生产周期明显缩短。

2、本发明由于没有透析的操作步骤，具有提取液体积小，水蛭素浓度高，可以提高水蛭素的收率并使乙醇的使用量明显减少。

具体实施方式

实施例1：

1)将菲牛蛭水解血240～300r/min边搅拌边加热，至菲牛蛭水解血全部变凝胶状后取出，迅速冷却至室温。

2)取一定量凝胶状的菲牛蛭水解血于组织捣碎机中以10000～12000r/min处理1.5～2分钟捣成浆状。

3)取一定量浆状物按重量加入2～2.5倍的生理盐水240～300r/min搅拌2.5～3小时。