[发明专利]一种红光检测缺血修饰白蛋白的试剂盒及其检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种红光检测缺血修饰白蛋白(IMA)的试剂盒及其检测方法。这种试剂盒及其检测方法主要是将病人的生物样品和第一试剂已知过量的二价金属离子溶液混合，混合液中含有与白蛋白结合的和未与白蛋白结合的金属离子，然后加入第二试剂pH8-10的金属离子显色剂溶液显色或用IMA测试纸条显色，在红光640-700nm波长检测金属离子显色剂和未与白蛋白结合的钴、锌、铜离子生成的蓝色配合物或和镍离子生成的绿色配合物的吸光度或反射光率，其测定值可诊断病人是否中风状。

背景技术

缺血通常是由于局部血管狭窄或阻塞导致组织器官的供氧能力下降，临床上常见的缺血性疾病有脑中风(Stroke)、急性冠状动脉综合症(Acute CoronarySyndrome，ACS)、下肢缺血性血管病变和肺栓塞等。

脑中风是一种突然起病的脑血液循环障碍性疾病，是严重危害人类健康和生命安全。我国每年发生中风病人达200多万，发病率高达120/10万，致残率高达75％，死亡约120万人。脑中风的早期发现对预后极其重要，当前脑中风的主要诊断手段是CT和核磁共振，但出现影像学的变化至少需要六至八小时，而抢救的黄金时间是在六小时内，因此迫切需要一种早期预警指标，IMA是目前最有潜力的脑中风的早期检测指标之一，可用于中风的早期诊断，降低致残率和死亡率。

冠心病是中国人死亡的第二位原因。ACS是以冠状动脉粥样硬化斑块破裂或糜烂，继发完全或不完全闭塞性血栓形成为病理基础的一组临床综合征；其症状包括胸痛、上腹部和臂部不适、喘气、恶心和呕吐等；常规心电图检测仅能发现约50％的患者，容易漏诊；临床目前常用的肌钙蛋白I对于ACS有较高的特异性，但灵敏度较低，不利于ACS的早期筛查，IMA是目前国际上公认的心肌缺血的早期检测指标，可用于心肌缺血的诊断，提高对ACS的早期诊断及用于ACS危险性分级，以降低对非缺血病人的收治率和心血管高危个体的漏诊率，节省医疗资源。

下肢缺血性血管病变主要分为下肢动脉硬化闭塞症和深静脉血栓，目前我国60岁以上血管病变的发病率高达79.9％，而70岁以上的发病率几乎接近100％。下肢动脉硬化闭塞症的主要原因为下肢中小动脉狭窄或闭塞引起的供血不足导致的坏死，主要表现为患者肢端因缺血坏死而发生坏疽，严重者须截肢。下肢深静脉血栓是由于血凝块堵塞深静脉，导致静脉回流严重受阻，从而使受堵塞的肢体其远端的肿胀疼痛，是肺栓塞的主要危险因素。据统计，美国每年肺栓塞发病率约60万，三分之一死亡，占死因第三位。约20～30％患者未及时或未能获诊断和治疗而死亡，若能及时诊断和给予抗凝治疗，病死率可望降低。因此对下肢缺血和肺栓塞的早期诊断是十分必要的，但目前除超声、CT等影像学外急需一种生化检测手段协助临床医师诊断，研究表明IMA对两者有重要的辅助诊断价值。

综上所述，在脑中风、急性冠状动脉综合征、下肢缺血性血管病变和肺栓塞等缺血性疾病早期诊断方面，IMA是理想的辅助诊断指标。IMA在缺血数分钟内就可升高，可衡量与缺血组织接触的白蛋白改变程度，IMA在心肌缺血时就升高，能在缺血缓解后高水平维持数小时，不象其它心肌标志物在坏死时才出现。已知报道有美国Bar-Or D等(US7,070,937，2006年)发明的IMA检测试剂盒，其基本原理为：正常对照组的样品中白蛋白以活性形式存在，加入过度已知量的钴离子溶液后，钴离子即可与白蛋白结合，溶液中未结合的钴离子浓度较低；而缺血病人的样品中含有较多缺血修饰白蛋白，由于IMA与钴离子结合的能力弱，溶液中就存在较高浓度的未结合的钴离子，采用二硫苏糖醇(DTT)显色剂显色，检测未与白蛋白结合的钴离子，在450-500nm波长检测样品的吸光度，所得数据与已知标准IMA曲线进行对照，即可得出IMA值。但是美国Bar-Or D方法在450-500nm波长检测IMA不能避免蛋白质特别是白蛋白、脂血、血红蛋白和胆红素等物质的严重干扰，影响灵敏度和特异性，限止了推广使用，因此开发一种新的IMA检测试剂盒及其检测方法，是临床上迫切需要的。

发明内容