[发明专利]Ⅱ型副流感病毒荧光定量PCR试剂盒及其检测方法

说明书

技术领域

本发明属病原体核酸检测领域，特别涉及一种II型副流感病毒荧光定量PCR检测试剂盒，同时，本发明还涉及一种荧光定量PCR试剂盒检测II型副流感病毒的方法，荧光定量PCR是通过实时监控收集PCR体系中的荧光信号，对样品中的初始模板进行定量，可广泛应用于医学、生物学等相应领域。

背景技术

副流感病毒(parainfluenza virus，PIV)，与流感病毒同属粘病毒。1992年第四次国际病毒命名委员会将其划归副粘病毒科(paramyxiviridae)，副粘病毒亚科(paranyxivirinae)。其成员多数是引起人畜共患病的重要病原体。近年来又发现一些新现病毒如megamyxoviruses(Hendra and Nipah viruses)以及metapneumovirus。

副流感病毒是幼儿、儿童和成人的显着上呼吸道感染最常见的病原体，据统计，大约30％～40％的婴幼儿急性呼吸道感染都是由人副流感病毒(human parainfluenzavirus，HPIV)引起的。和呼吸道合孢病毒一样，副流感病毒可以重复感染。副流感病毒分为一至四型，每种亚型都有不同的临床和流行病学特点。一型和二型副流感病毒是儿童哮吼症的主要原因，在2-4岁儿童中症状最严重。一型和二型副流感病毒也可导致其他上/下呼吸道病症。二型副流感病毒较少发现。三型副流感病毒虽然也导致哮吼症，但是它作为仅次于呼吸道合孢病毒的幼儿支气管炎、肺炎的病原体更为人熟知。三型副流感病毒在1岁以下儿童中症状最严重。四型副流感病毒一般引起轻微上呼吸道疾病。

副流感病毒根据遗传性与抗原性，HPIV可分为4种血清型HPIV 1～4。其中HPIV4又可分为A、B两个亚型。病毒有包膜，包膜上有两种刺突，一种是HN蛋白，具有HA和NA的作用；另一种是F蛋白，具有使细胞融合及溶解红细胞的作用，它由F1和F2亚基通过2个二硫键连接而成。病毒包膜内为核衣壳，也称RNP核心，由病毒RNA(vRNA)，N蛋白，P蛋白和L蛋白组成。副流感病毒基因组由不分节段的ssRNA组成，包括约15，500个核苷酸，编码至少6种常见的结构蛋白(3’-N-P-C-M-F-HN-L-5’)。研究发现，HN糖蛋白很可能以四聚体形式存在于HPIV包膜和被感染细胞的胞膜上，通过唾液酸受体使病毒吸附于宿主细胞表面，发挥神经氨酸酶活性。Moscona和Paluso的实验表明，HN与细胞受体的相互作用是特异而复杂的，它涉及HN和F这两种表面糖蛋白，且因HPIV型别的不同而多有变化，因此，人副流感病毒血清型可根据HN基因进行分型。

目前副流感病毒的临床检测常用分离培养、免疫荧光试验、酶联免疫反应和PCR等方法；病原体分离培养法虽然有“金标准”之称，但其技术复杂、费时长，而且其灵敏度容易受病原体不稳定的影响，不适合用于早期诊断。而免疫荧光试验、酶联免疫反应等方法由于特异性差、敏感性低等问题在临床应用价值受限。普通PCR只能定性或半定量检测，无法评价治疗方案的效果，且操作步骤繁琐，技术要求高，易造成产物污染，出现假阳性，无法标准化，不利于推广。