[发明专利]一种人转铁蛋白的表达载体及其构建方法和应用无效
| 申请号： | 200910199816.0 | 申请日： | 2009-12-02 |
| 公开（公告）号： | CN101845458A | 公开（公告）日： | 2010-09-29 |
| 发明（设计）人： | 曾溢滔;颜景斌;黄淑帧 | 申请（专利权）人： | 上海市儿童医院;上海滔滔转基因工程股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/66;C07K14/79 |
| 代理公司： | 上海智信专利代理有限公司 31002 | 代理人： | 薛琦;朱水平 |
| 地址： | 200040 上*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 铁蛋白 表达 载体 及其 构建 方法 应用 | ||
1.一种人转铁蛋白的表达载体，其特征在于，所述载体由人转铁蛋白小基因，兔转铁蛋白启动子，兔转铁蛋白增强子以及去除CMV启动子的pcDNA3.1(-)载体构成。
2.根据权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述兔转铁蛋白启动子接在所述人转铁蛋白小基因的上游，所述兔转铁蛋白增强子接在所述兔转铁蛋白启动子的上游。
3.根据权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述人转铁蛋白小基因包含人转铁蛋白的cDNA和内含子1。
4.根据权利要求3所述的表达载体，其特征在于，所述人转铁蛋白小基因的序列如SEQ ID No.1所示。
5.根据权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述兔转铁蛋白启动子的序列如SEQ ID No.2所示。
6.根据权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述兔转铁蛋白增强子的序列如SEQ ID No.3所示。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的表达载体，其特征在于，所述兔转铁蛋白增强子的数目为一个，构成的载体为δ3.1-EP-TFN。
8.根据权利要求7所述的表达载体，其特征在于，所述δ3.1-EP-TFN载体的序列如SEQ ID No.4所示。
9.根据权利要求1-6中任一项所述的表达载体，其特征在于，所述兔转铁蛋白增强子的数目为两个，串联接在所述兔转铁蛋白启动子的上游，构成的载体为δ3.1-2EP-TFN。
10.根据权利要求9所述的表达载体，其特征在于，所述δ3.1-2EP-TFN载体的序列如SEQ ID No.5所示。
11.一种人转铁蛋白表达载体的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
A、构建去除CMV启动子的载体pcDNA3.1；
B、扩增人转铁蛋白小基因，接入pcDNA3.1载体，获得pcDNA3.1-TFN载体；
C、扩增兔转铁蛋白启动子，接入pSL301载体，获得301-RTF载体；
D、扩增兔转铁蛋白增强子，接入pGEM-T载体，获得T-RTFE载体；
E、两个T-RTFE载体和一个301-RTF载体连接获得pSL301-2EP载体；
F、pSL301-2EP载体和δpcDNA3.1载体连接获得δ3.1-2EP载体；
G、δ3.1-2EP载体和pcDNA3.1-TFN载体连接获得δ3.1-2EP-TFN载体。
12.一种人转铁蛋白表达载体的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
A、构建去除CMV启动子的载体pcDNA3.1；
B、扩增人转铁蛋白小基因，接入pcDNA3.1载体，获得pcDNA3.1-TFN载体；
C、扩增兔转铁蛋白启动子，接入pSL301载体，获得301-RTF载体；
D、扩增兔转铁蛋白增强子，接入pGEM-T载体，获得T-RTFE载体；
E、两个T-RTFE载体和一个301-RTF载体连接获得pSL301-2EP载体；
F、双酶切pSL301-2EP载体，补平、去磷酸化自连形成pSL301-EP载体；
G、pSL301-EP载体和δpcDNA3.1连接后获得δ3.1-EP载体；
H、δ3.1-EP载体和pcDNA3.1-TFN载体连接后获得δ3.1-EP-TFN载体。
13.根据权利要求11或12所述的构建方法，其特征在于，所述人转铁蛋白小基因包含人转铁蛋白的cDNA和内含子1。
14.一种人转铁蛋白表达载体在制备人转铁蛋白中的应用。
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