[发明专利]一种筛选麦类作物耐赤霉病菌毒素的方法

权利要求书

1.一种筛选麦类作物耐赤霉病菌粗毒素的方法，该方法包括：

1)取麦类作物幼穗花药置于添加3.9×10^-5～1.95×10^-4mol/L赤霉病菌毒素的0.2-0.5M甘露醇提取液中培养1-3天；

2)由步骤1)处理后的花药分离获得小孢子；

3)将步骤2)获得的小孢子置于添加赤霉病菌毒素0.50-1.0×10^-4mol/L、2，4，5-T 0.3-0.8mg/L、KT 0.3-0.8mg/L，麦芽糖60-120g/L，pH 5.5-6.2的N₆诱导培养基中，获得胚状体；

4)将步骤3)获得的胚状体置于添加NaCl 200-500mg/L、6-BA 0.3-1.2mg/L、KT 0.5-2.0mg/L、NAA 0.01-0.1mg/L和麦芽糖10-50g/L，PH为5.5-6.2的2/3MS分化培养基中，获得再生植株，该再生植株为耐赤霉病菌粗毒素的麦类作物。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述步骤1)前，先在0-8℃下处理所述麦类作物幼穗花药15-30天。

3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述方法还包括：

5)将步骤4)所得的再生植株转入添加有NAA 0.02-0.08mg/L、多效唑2.0-10.0mg/L和蔗糖10-40g/L，pH5.6-6.0的1/2MS生根壮苗培养基中，在25±1℃，每天10～12小时光照的条件下进行25～30天的生根壮苗培养。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法包括：

1)从供体植株上取幼穗在5℃的低温下处理20d，灭菌后在超净台上分离出花药；

2)将步骤1)所得花药置于添加1.5×10^-4mol/L赤霉病菌毒素的0.3M甘露醇预处理/提取液中培养2d，获得粗毒素胁迫处理过的花药；

3)将步骤2)获得的花药在超净台上进行旋切分离，获得游离小孢子；

4)将步骤3)获得的小孢子置于添加赤霉病菌毒素0.75×10^-4mol/L、2，4，5-T0.5mg/L、KT 0.5mg/L，麦芽糖90g/L，pH 5.8的N₆诱导培养基中，获得胚状体；

5)将步骤4)获得的胚状体置于添加NaCl 300mg/L、6-BA 0.5-1.5mg/L、KT 0.5-2.0mg/L、NAA 0.01-0.1mg/L和麦芽糖30g/L，PH为5.8的2/3MS分化培养基中，获得再生植株。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述麦类作物选自大麦和小麦。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)中所述甘露醇提取液为含有0.8-1.6×10^-4mol/L赤霉病菌毒素的0.3-0.4M甘露醇溶液。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤4)中所述NaCl含量为300-500mg/L。

8.一种用于实施权利要求1所述的方法的套盒，其特征在于，该套盒含有权利要求1中所述的甘露醇提取液、N₆诱导培养基和/或2/3MS分化培养基。

9.如权利要求8所述的套盒，其特征在于，所述甘露醇提取液为添加3.9×10^-5～1.95×10^-4mol/L赤霉病菌毒素的0.2-0.5M甘露醇提取液。

10.如权利要求8所述的套盒，其特征在于，所述套盒含有甘露醇提取液、N₆诱导培养基和2/3MS分化培养基，

所述甘露醇提取液为添加3.9×10^-5～1.95×10^-4mol/L赤霉病菌毒素的0.2-0.5M甘露醇提取液；

所述N₆培养基添加有赤霉病菌毒素0.50-1.0×10^-4mol/L、2，4，5-T0.3-0.8mg/L、KT 0.3-0.8mg/L，麦芽糖60-120g/L，pH 5.5-6.2；

所述2/3MS分化培养基添加NaCl 200-500mg/L、6-BA 0.3-1.2mg/L、KT0.5-2.0mg/L、NAA 0.01-0.1mg/L和麦芽糖10-50g/L，pH为5.5-6.2。