[发明专利]一种抗原递呈细胞靶向纳米粒子及其制备方法

权利要求书

1.一种抗原递呈细胞靶向纳米粒子及其制备方法，其特征在于该纳米粒是甘露糖通过化学反应形成化学键连接到壳聚糖上，再采用复乳法(W/O/W)制备PLGA纳米粒。

2.根据权利要求1所述的抗原递呈细胞的靶向载体，其特征在于通过该法制得的纳米粒粒径在200-500nm之间，分布较窄，载药量约为6-10％，具有明显的靶向抗原递呈细胞和缓释性能。

3.根据权利要求1-2所述的纳米粒子，其特征在于壳聚糖的分子量为8000-10000道尔顿，脱乙酰度大于90％；PLGA，分子量为20000-40000道尔顿，PLA∶PGA比例为：50∶50-25∶75，PLGA浓度为10mg/mL-50mg/mL；甘露糖修饰的壳聚糖的浓度为0.5％-5％。

4.根据权利要求1-3所述的抗原递呈细胞的靶向纳米粒，其特征在于包裹的药物为多肽及蛋白类药物或肿瘤治疗疫苗等，包括：白蛋白、促黄体激素、曲普瑞林、亮丙瑞林、布舍瑞林、生长激索释放因子、促甲状腺激索释放激索、白细胞介素(IL)-2、IL-3、IL-4、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、α-干扰素、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、粒细胞单核细胞集落刺激因子(GM-CSF)中的一种或多种混合物。

5.根据权利要求1-3所述的巨噬细胞的靶向纳米粒，其特征在于其制备方法如下：

(1)将含有蛋白质的溶液(内水相)，加入到PLGA的有机溶液中，用超声波细胞粉碎仪超声乳化，得到初乳(W₁/O)；

(2)然后将初乳加入PVA中，再乳化，得到内水相含OVA的复乳(W₁/O/W₂)；

(3)复乳注入到含有甘露糖修饰的壳聚糖的PVA中，于室温下挥发有机溶剂；

(4)离心，收集沉淀，加入冻干保护剂，冷冻干燥。

6.根据权利要求1-3所述的巨噬细胞的靶向纳米粒，其特征在于该纳米粒是甘露糖通过化学反应连接到壳聚糖上，具体合成包括以下步骤：

(1)D-甘露糖与乙酸酐、氯化锌，加热反应，生成全乙酰化甘露糖(产物1)；

(2)全乙酰化甘露糖与溴代试剂中，室温搅拌，得到溴代四乙酰甘露糖(产物2)；

(3)溴代四乙酰甘露糖与羟基苯甲醛、四正丁基溴化铵反应，得1-对羟基苯基四乙酰甘露糖(产物3)；

(4)将1-对羟基苯基四乙酰甘露糖(产物3)悬浮于无水乙醇中，加入乙醇钠溶液，加热回流，得1-对羟基苯基甘露糖(产物4)；

(5)壳聚糖溶入乙酸溶液，搅拌下慢慢滴加产物4，继续反应，得淡黄色粉末状固体产物，把得到的上述产物倒入乙醇和水的混合溶液中，加入硼氢化钠，搅拌反应，最后加入丙酮，再反应，得淡黄色粉末状固体产物，即为甘露糖修饰的壳聚糖(产物5)。

7.根据权利要求5所述的有机溶剂，其特征在于优选乙酸乙酯，体积为2-5mL。

8.根据权利要求5所述的冻干保护剂，其特征在于选择乳糖、甘露醇或者蔗糖中的一种或两种以上，含量为2-10％。

9.根据权利要求5所述的抗原递呈细胞的靶向纳米粒，其特征在于内水相体积为100-250μL，pH值为3-7，PVA浓度为1％-5％；外水相PVA的水解度为87％-90％，分子量为17000道尔顿，溶度为1％-7％，与有机溶剂的比例为1∶3-1∶7。

10.根据权利要求5所述的抗原递呈细胞的靶向纳米粒，其特征在于超声使用超声波细胞粉碎仪，超声功率为200-600W。