[发明专利]一种抗原递呈细胞靶向纳米粒子及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种抗原递呈细胞(包括巨噬细胞和树突状细胞)靶向纳米粒子及其制备方法，其特征在于该纳米粒是甘露糖通过化学反应连接到壳聚糖上，再采用复乳法(W/O/W)制备PLGA纳米粒，通过该法制得的纳米粒粒径在200-500nm之间，分布较窄，载药量约为6-10％，具有明显的靶向抗原递呈细胞和缓释性能。

背景技术

固有免疫(innate immunity)又称天然免疫(natural immunity)，是指机体与生俱来的抵抗外来病原体侵袭清除体内抗原异物的一系列预防能力。固有免疫的作用由体内长期进化形成的固有免疫系统(innate immunity system)所执行，包括固有免疫屏障，分子和细胞。其中固有免疫细胞包括吞噬细胞、树突状细胞、自然杀伤细胞、自然杀伤T细胞、γδT细胞和B1细胞等，是固有免疫的主要执行者。

其中激活的巨噬细胞可以识别、结合然后杀伤肿瘤细胞，在抗肿瘤上发挥着重要的作用。巨噬细胞表面具有特异性的甘露糖受体(MMR)表达，甘露糖受体属于C型凝集素超家族，可快速循环于细胞膜和早期内体(early endosome)间，在较短的时间内即可内化大量模型抗原，诱导免疫应答反应。Mulller[C.D.Muller，F.Schuber，Neo-mannosylated liposomes：synthesis and inte-raction with mouse kupffer cells and resident peritoneal macrophages，Biochim.Bio-phys.Acta Ser.Biomembr.986(1989)97-105.]等人研究了新型的甘露糖修饰的脂质体与Kupffer细胞和腹腔巨噬细胞之间的作用，结果表明甘露糖修饰的脂质体与未修饰的脂质体相比能使巨噬细胞的摄取增加2-4倍。

聚乳酸-聚乙醇酸的共聚物(PLGA)系生物可降解性合成高分子，具有安全性高、生物相容性好、药物释放速度随聚合物比例和分子量的不同调整的特点，成为迄今为止研究最多、获得FDA批准上市的生物可降解材料。而壳聚糖为自然界贮量丰富而且是唯一带正电荷的具有生物可降解、吸附性和安全性好的高分子材料，目前也是广泛应用于药物和基因给药的载体研究的材料。

发明内容

本发明公开了一种巨噬细胞靶向纳米粒子及其制备方法，其特征在于该纳米粒是甘露糖通过化学反应连接到壳聚糖上，再采用复乳法(W/O/W)制备PLGA纳米粒，通过该法制得的纳米粒粒径在200-500nm之间，分布较窄，载药量约为6-10％，具有明显的靶向抗原递呈细胞和缓释性能，其中壳聚糖的分子量为8000-10000道尔顿，脱乙酰度大于90％；PLGA，分子量为20000-40000道尔顿，PLA∶PGA比例为：50∶50-25∶75，PLGA浓度为10mg/mL-50mg/mL；甘露糖修饰的壳聚糖的浓度为0.5％-5％。

本发明的巨噬细胞的靶向纳米粒，包裹的药物为蛋白类药物，包括：卵白蛋白、促黄体激素、曲普瑞林、亮丙瑞林、布舍瑞林、生长激索释放因子、促甲状腺激索释放激索、白介索-2、a一于扰素、肿瘤坏死因子、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子中的一种。

本发明甘露糖修饰的壳聚糖的合成合成路线具体步骤如下：

(1)氯化锌加入乙酸酐，加热使ZnCl₂溶解。加入D-甘露糖加热反应，乙酸乙酯萃取，蒸去溶剂，得到全乙酰化甘露糖(产物1)。

(2)红磷悬浮于乙酸中，滴加溴，控制温度低于15℃。滴加完毕，室温继续搅拌至红磷完全溶解，过滤，母液低温保存，将全乙酰化甘露糖(产物1)分批加入到上述的溴代试剂中，室温搅拌，氯仿萃取，过柱，除去溶剂得到溴代四乙酰甘露糖(产物2)。

(3)羟基苯甲醛、四正丁基溴化铵加入三氯甲烷溶液中，再加入含溴代四乙酰基甘露糖的三氯甲烷溶液，反应结束后用二氯甲烷萃取三次，过柱，除去溶剂，得白色固体，1-对羟基苯基四乙酰甘露糖(产物3)。

(4)将1-对羟基苯基四乙酰甘露糖(产物3)悬浮于无水乙醇中，加入0.2N乙醇钠溶液。加热回流，减压浓缩、冷却，有白色固体析出，抽滤，冷乙醇洗涤，得1-对羟基苯基甘露糖(产物4)。