[发明专利]一种白地霉生产低温中性脂肪酶的制备方法

权利要求书

1.一种低温中性脂肪酶的生产方法，其包括，

A.对白地霉(Geotrichum candidum)CGMCC No.1972进行菌种活化培养步骤；

B.利用步骤A获得的活化菌种进行发酵步骤；

C.发酵后的纯化提取：所述的白地霉(Geotrichum candidum)CGMCC No.1972的发酵液经双水相萃取和Sephadex G-75凝胶过滤纯化，双水相体系在22℃按重量配制，体系总质量为10g，酶液量为3g，在PEG浓度为15％，硫酸铵浓度为22.5％及pH8.0时获得脂肪酶；双水相萃取后的酶样品用PEG20000浓缩至1-2mL，上样至预先用重蒸水平衡好的2.0×20cm的Sephadex G-75凝胶层析柱上，用0.1mmol/L磷酸缓冲液进行洗脱，流速为0.4mL/min，并用SDS-PAGE测得单一蛋白条带，获得纯化的低温中性脂肪酶。

2.如权利要求1所述低温中性脂肪酶的生产方法，其特征在于，在菌种活化培养后该菌产酶的条件为起始pH8.0，培养温度24℃，180rpm振荡培养48h，其培养基含有重量百分比的1％可溶性淀粉、1％豆油、2％玉米浆、0.1％(NH₄)₂SO₄、0.5％K₂HPO₄、0.1％MgSO₄·7H₂O和0.1％FeSO₄·7H₂O。

3.如权利要求1所述低温中性脂肪酶的生产方法，其特征在于，在发酵培养基中，以玉米浆或酵母粉之一为氮源。

4.如权利要求1所述低温中性脂肪酶的生产方法，其特征在于，在发酵培养步骤中，菌株生长温度是20℃，按体积比计，装液量为12-20％，接种量为10％，发酵温度24℃，搅拌速度为180rpm，发酵周期48小时。