[发明专利]限定的细胞培养表面及其使用方法

权利要求书

1.一种细胞培养基底，包含：

具有薄膜粘附于其上的细胞培养表面，其中所述薄膜包含一种或多种等离子聚合单体；以及

在所述涂覆有薄膜的表面上的涂层，所述涂层从包含一种或多种细胞外基质蛋白和水性溶剂的涂覆溶液中沉积形成，其中涂覆溶液中总细胞外基质蛋白浓度为约1ng/mL到约1mg/mL。

2.权利要求1所述的细胞培养基底，其中所述一种或多种单体选自丙烯酸、甲基丙烯酸、醋酸、乙烯基醋酸以及它们的组合。

3.权利要求1所述的细胞培养基底，其中所述一种或多种单体选自烯丙胺、甲胺、丙胺、庚胺和丙二胺。

4.权利要求1所述的细胞培养基底，其中所述单体选自烷烃、烯烃、二烯、苯乙烯以及它们的组合。

5.权利要求1所述的细胞培养基底，其中所述一种或多种单体选自胺、碳氢化合物以及它们的组合，其中胺与碳氢化合物的比例在约100∶0到约20∶80之间。

6.权利要求1所述的细胞培养基底，其中涂覆组合物中总蛋白的浓度为约1μg/mL到约300μg/mL。

7.权利要求1所述的细胞培养基底，其中涂覆组合物中总蛋白的浓度为约5μg/mL到约200μg/mL。

8.权利要求1所述的细胞培养基底，其中涂覆组合物包含细胞外基质蛋白，所述细胞外基质蛋白选自天然的、重组的、合成的细胞外基质蛋白及它们的组合。

9.权利要求1所述的细胞培养基底，其中涂覆组合物包含完整的细胞外基质蛋白或细胞外基质蛋白的片段。

10.权利要求1所述的细胞培养基底，其中涂覆细合物进一步包含选自巢蛋白、硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(HSPG)、生长因子以及它们的组合的组分。

11.权利要求1所述的细胞培养基底，其中水性溶剂选自缓冲液、细胞培养介质以及它们的组合。

12.一种制备细胞培养基底的方法，包含：

提供细胞培养表面；

将薄膜等离子聚合到所述表面上以形成涂覆有薄膜的表面，其中所述等离子聚合利用一种或多种单体；以及

引入涂覆溶液到所述涂覆有薄膜的表面以形成细胞培养基底，所述涂覆溶液包含一种或多种细胞外基质蛋白和水性溶剂，其中涂覆溶液中总细胞外基质蛋白的浓度为约1ng/mL到约1mg/mL。

13.权利要求12所述的方法，进一步包含：

孵育所述细胞培养基底，其中将所述一种或多种细胞外基质蛋白固定在所述涂覆有薄膜的表面上。

14.权利要求12所述的方法，进一步包含：

冷冻所述细胞培养基底一段时间，然后孵育所述细胞培养基底，其中将所述的一种或多种胞外基质蛋白固定在所述涂覆有薄膜的表面上。

15.一种培养干细胞的方法，包括：

提供权利要求1所述的细胞培养基底；

将干细胞悬浮液应用到所述细胞培养基底上；

在37℃，含5％CO₂的潮湿空气中孵育在所述细胞培养基底上的所述干细胞悬浮液；以及

使所述干细胞粘附在细胞的所述细胞培养基底上，其中粘附的细胞主要保持在未分化状态。

16.权利要求15所述的方法，进一步包含在应用所述真核干细胞悬浮液之前引入细胞培养基到所述细胞培养基底。

17.权利要求15所述的方法，其中所述细胞培养基包含生长培养介质。

18.权利要求15所述的细胞培养基底，其中所述干细胞为真核干细胞。

19.权利要求15所述的细胞培养基底，其中所述干细胞为胚胎干细胞。

20.权利要求15所述的细胞培养基底，其中所述干细胞为人胚胎干细胞。

21.权利要求15所述的细胞培养基底，其中所述干细胞为人间充质干细胞。

22.权利要求15所述的细胞培养基底，其中所述干细胞为人神经元干细胞。