[发明专利]应用毕赤酵母的pGAP调控表达转酮醇酶的方法无效
| 申请号： | 200910209771.0 | 申请日： | 2009-10-25 |
| 公开（公告）号： | CN101698835A | 公开（公告）日： | 2010-04-28 |
| 发明（设计）人： | 屈直;张爱联;张添元;尹慧祥;罗进贤 | 申请（专利权）人： | 中国热带农业科学院热带生物技术研究所 |
| 主分类号： | C12N9/10 | 分类号： | C12N9/10;C12N15/81;C12R1/84 |
| 代理公司： | 海口翔翔专利事务有限公司 46001 | 代理人： | 莫臻 |
| 地址： | 571101 *** | 国省代码： | 海南;66 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 应用 酵母 pgap 调控 表达 转酮醇酶 方法 | ||
1.一种应用毕赤酵母的pGAP调控表达转酮醇酶的方法，其特征在于，其步骤如下：
1)、首先从毕赤酵母中扩增pGAP启动子；
2)、在转酮醇酶序列的3’末端融合His6标签，构建由pGAP调控转酮醇酶基因的毕赤酵母表达载体，并将这一载体转化毕赤酵母基因组；
3)、根据载体上所带的抗性基因筛选高拷贝重组子作为工程菌株；
4)、将工程菌株接种于含碳源的液体培养基中，于28～30℃在生物反应器中发酵工程菌1～2d分泌表达转酮醇酶；所述液体培养基是由以下组分组成：85％磷酸25～28ml/L，CaSO4·2H2O 0.8～1.2g/L，K2SO4 17～19g/L，MgSO4·7H2O 13～16g/L，KOH 3.5～4.5g/L，碳源15～45g/L，蛋白胨18～22g/L，Yeast extract 8～12g/L，PTM4 3～5ml/L；所述PTM4是由以下组分组成：CuSO4·5H2O 2.0g/L，NaI·2H2O0.1g/L，MnSO4·H2O 3.0g/L，Na2MoO4·2H2O 0.2g/L，H3BO3 0.02g/L，CoCl2·6H2O 1.05g/L，ZnCl2 7.0g/L，Fe2(SO4)3·7H2O 22g/L，生物素0.2g/L，硫酸1ml/L。
2.根据权利要求1所述的应用毕赤酵母的pGAP调控表达转酮醇酶的方法，其特征在于：所述碳源是甘油、油酸、山梨醇、葡萄糖、乳酸、甘氨酸、丙氨酸、海藻糖或甘露醇。
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