[发明专利]人血清白蛋白与尿酸氧化酶的融合蛋白及其制备方法无效
申请号: | 200910215446.5 | 申请日: | 2009-12-31 |
公开(公告)号: | CN101875923A | 公开(公告)日: | 2010-11-03 |
发明(设计)人: | 刘国安;张加慧;刘翔;胡芬芬;刘沐荣;张弨 | 申请(专利权)人: | 杭州北斗生物技术有限公司 |
主分类号: | C12N9/06 | 分类号: | C12N9/06;C12N15/81;A61P19/06;C12R1/67;C12R1/06;C12R1/72 |
代理公司: | 杭州金源通汇专利事务所(普通合伙) 33236 | 代理人: | 唐迅 |
地址: | 310011 浙江*** | 国省代码: | 浙江;33 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 血清 白蛋白 尿酸 氧化酶 融合 蛋白 及其 制备 方法 | ||
1.一种人血清白蛋白和尿酸氧化酶融合蛋白,其特征在于:人血清白蛋白和尿酸氧化酶的融合蛋白由人血清白蛋白氨基酸序列、尿酸氧化酶氨基酸序列和连接肽组成,融合蛋白序列由人血清白蛋白氨基酸序列、尿酸氧化酶氨基酸序列通过连接肽连接。
2.根据权利要求1所述的人血清白蛋白和尿酸氧化酶融合蛋白,其特征在于:人血清白蛋白的氨基酸序列在融合蛋白的N端,尿酸氧化酶氨基酸序列在融合蛋白的C端;或者,人血清白蛋白的氨基酸序列在融合蛋白的C端,尿酸氧化酶氨基酸序列在融合蛋白的N端,两个蛋白质的氨基酸序列通过连接肽连接。
3.根据权利要求2所述的人血清白蛋白和尿酸氧化酶融合蛋白,其特征在于:连接肽氨基酸序列为[GlyGlyGlyGlySer]n,其中n为1-10的整数。
4.根据权利要求3所述的人血清白蛋白和尿酸氧化酶融合蛋白,其特征在于:连接肽氨基酸序列为[GlyGlyGlyGlySer]n,其中n为1-3的整数。
5.根据权利要求1-4任意一项权利要求所述的人血清白蛋白和尿酸氧化酶融合蛋白,其特征在于:尿酸氧化酶氨基酸序列是黄曲霉、球形节杆菌或假丝酵母来源的真菌或微生物尿酸氧化酶及其突变体,或者,尿酸氧化酶氨基酸序列是来源于哺乳动物尿酸氧化酶序列及其突变体;或者,尿酸氧化酶氨基酸序列是来源于果蝇的无脊椎动物的尿酸氧化酶序列及其突变体;或者,尿酸氧化酶氨基酸序列是来源于植物的重组尿酸氧化酶及其突变体,或者是这些序列不同片段的嵌合体。
6.根据权利要求5所述的人血清白蛋白和尿酸氧化酶融合蛋白,其特征在于:尿酸氧化酶为黄曲霉尿酸氧化酶。
7.根据权利要求1-6任意一项权利要求所述的人血清白蛋白和尿酸氧化酶融合蛋白,其特征在于:融合蛋白的分子量为90kd-105kd。
8.根据权利要求1-6任意一项权利要求所述的人血清白蛋白和尿酸氧化酶融合蛋白,其特征在于:融合蛋白的酶比活性为3.0-8.0EAU/mg。
9.一种制备如权利要求1所述的人血清白蛋白和尿酸氧化酶融合蛋白的方法,其特征在于:克隆人血清白蛋白和尿酸氧化酶基因,拼接获得人血清白蛋白和尿酸氧化酶融合蛋白基因,构建重组质粒,转化酵母宿主菌,筛选获得工程菌株,培养工程菌,诱导人血清白蛋白和尿酸氧化酶融合蛋白的表达,分离纯化获得人血清白蛋白和尿酸氧化酶融合蛋白。
10.如权利要求9所述一种人血清白蛋白和尿酸氧化酶融合蛋白的制备方法,其特征在于:分离纯化的方法包括超滤、盐析、沉淀、离心、透析、离子交换层析、疏水层析、亲和层析、反相层析、分子筛层析技术中的一种或几种。
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