[发明专利]人血清白蛋白与尿酸氧化酶的融合蛋白及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种融合蛋白，尤其涉及一种人血清白蛋白和尿酸氧化酶的融合蛋白及其制备方法。

背景技术

嘌呤是生物体遗传物质核酸的重要组成部分，核酸代谢产生嘌呤核苷酸，后者分解产物黄嘌呤在黄嘌呤氧化酶的作用下产生尿酸，尿酸可进一步在尿酸氧化酶(Urate Oxidase，UOX)的作用下分解为尿囊素、尿囊酸、CO2和NH3。人类和一些灵长类动物体内缺乏有活性的尿酸氧化酶，因此尿酸是人类和这些动物嘌呤代谢的最终产物。尿酸溶解度较低，经尿酸氧化酶的氧化后分解为溶解度更高的尿囊素，使核酸代谢产物更容易排出体外。如果血液和尿液中尿酸浓度持续升高出现高尿酸血症，常导致疾病发生，其中比较有代表性的是痛风。

痛风是尿酸代谢紊乱引起的一种慢性疾病，尿酸盐结晶在关节和软组织沉积是其发病原因，伴随着炎症，有些病人最后发展为关节受损或者骨关节病。随着生活水平的不断提高，高尿酸血症和痛风发病率明显增高。流行病学的调查显示，国外至上世纪90年代，英国痛风患者20年间增加了3倍，1990至1999年间美国痛风患者增加80％，加拿大30岁以上男性和50岁以上女性痛风发病率已达2％，80岁以上男性达9％。我国痛风发病率为0.3％，现有400多万痛风患者，每年有200多急性发作，近100万人痛风致残。积极控制高尿酸血症和痛风危险因素是减少痛风发作的关键，也是降低心血管疾病危险的重要环节之一。

目前痛风治疗主要使用痛风炎症干扰药物和降尿酸化学药，代表性药物有秋水仙碱、非甾体抗炎药、肾上腺皮质激素、尿酸促排药、抑制尿酸生成药。秋水仙碱具有缓解痛风炎症的特异性，通常是小剂量多次口服用药，但该药有严重的胃肠道反应。其它抗炎药也都起到改善症状的作用，但副作用都很大。丙磺舒、苯磺唑酮、痛风利仙是常用的促尿酸排泄药物，别嘌呤醇抑制尿酸的形成，这些药都需要服用较长时间来维持治疗效果，它们的副作用发生率相同，而以别嘌呤醇最严重，常发生别嘌呤过敏综合症达10％，这些患者死亡率达25％。新近开发的新型黄嘌呤氧化酶抑制剂Febuxostat作用强于别嘌呤醇，但需要常年用药。有一部分痛风患者目前的治疗方法不起作用，这些难治性痛风患者经常发生急性关节炎，慢性关节变形，出现尿酸盐引起的结节瘤，患者身体活动能力丧失。这些严重的痛风患者尤其需要有效的治疗手段以缓解病情，提高生活质量。

国外已开发了重组尿酸氧化酶产品(Rasburicase)，尿酸氧化酶能够特异性地将尿酸分解为溶解度更高更容易排除体外的尿囊素。国外上市的重组尿酸氧化酶临床适应症为：用于预防和治疗儿童白血病、淋巴癌和恶性实体瘤治疗中可能发生的肿瘤溶解综合征导致的高尿酸血症。该产品主要的副作用是发生免疫反应、产生抗体和过敏反应，其次是半衰期短。对于痛风患者，无法长期用药。为了将尿酸氧化酶用于痛风患者，有必要采用蛋白质缓释技术延长其半衰期，降低抗原性。

聚乙二醇(Polyethlene glycol，PEG)是一种无毒、无免疫原性的水溶性高分子物质，可以通过共价键结合方式修饰蛋白质。蛋白质的聚乙二醇化修饰是克服蛋白质免疫原性的-种有效方法，聚乙二醇修饰蛋白质药物不仅可以降低免疫原性和毒性、而且能明显提高蛋白质药物的稳定性，减少蛋白质分子通过肾脏的排泄，延长体内半衰期。美国Savient公司开发的聚乙二醇修饰尿酸氧化酶Pegloticase已于2008年8月完成三期临床试验向美国FDA提交新药注册申请，试验结果表明该产品对痛风有明显的治疗作用，但是88％病人会出现抗体，引起疗效的降低，5％病人有过敏反应。而且活化的聚乙二醇价格昂贵，使得这类产品的价格很高。

以人血清白蛋白(Human Serum Albumin，HSA)为载体的融合蛋白技术-白蛋白融合技术(Albumin fusion technology)是另一倍受关注的延长蛋白质半衰期的方法。由于HSA无酶活性和免疫原性，人体相容性好，分子量大(约为66kDa)，半衰期长约19d，微生物发酵表达量高[Chuang VT，Kragh-Hansen U，Otagifi M.Phammceutical strategies utilizingrecombinant human serum albumin[J]Pharm Res，2002，19(5)：569-577]等优点，通过构建融合蛋白技术增加多肽/蛋白类药物分子量可延长药物半衰期。

发明内容

本发明的目的是提供一种半衰期长的尿酸氧化酶新型制剂，特别是人血清白蛋白和尿酸氧化酶的融合蛋白。