[发明专利]对虾白斑综合征病毒VP37酵母表面展示与应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种基因工程技术，具体地说，本发明涉及对虾白斑综合征病毒结构蛋白VP37酵母表面展示方法，本发明还涉及展示的对虾白斑综合征病毒VP37的生产方法与应用。 

背景技术

对虾白斑杆装病毒(WSSV)是近年来危害我国及亚洲太平洋地区人工养殖对虾的主要病毒原之一，它能高致死率地侵染绝大多数种类的对虾，此外还可侵染淡水及海洋生态系统中多种蟹类、龙虾类、端足类、水蝇类等甲壳纲动物，具有较广泛的宿主范围，给水产养殖业造成严重的经济损失。因此针对对虾白斑综合征病毒的药物开发受到广泛关注。 

对虾为无脊椎动物，不具备特异性免疫系统，但近年的研究表明，对虾存在类免疫(quasi-immune)应答机制，WSSV的重组蛋白可以诱导对虾产生抗病保护效应。目前有关对虾白斑综合征病毒亚单位疫苗的研究大多围绕诱导产生高效免疫应答能力的囊膜蛋白进行免疫接种方式来展开。已研发的包括以WSSV结构蛋白为抗原的蛋白类疫苗(Witteveldt J，Cifuentes C C，Vlak J M，et al.Protection of Penaeusmonodon against White Spot Syndrome Virus by Oral Vaccination.Journal of Virology，2004，2057-2061.和Vaseeharan B，Anand T P，Murugan T，et al.Shrimp vaccination trials with the VP292protein of white spotsyndrome virus.Letters in Applied Microbiology，2006，137-142.和Jha R K，Xu Z R，Shen J，Bai S J，et al.Theefficacy of recombinant vaccines against white spot syndrome virus in Procambarus clarkii.Immunology Letters，2006，105：68-76等)、核酸类疫苗(Rout N，Kumar S，Jaganmohan S，et al.DNA vaccines encoding viralenvelope proteins confer protective immunity against WSSV in black tiger shrimp.Vaccine，2007，25：2778-2786.和Rajeshkumar S，Venkatesan C，Sarathi M.Oral delivery of DNA vaccine encoding VP37against white spotsyndrome virus in crayfish by attenuated Salmonella typhimurium.Fish&Shellfish Immunology，2009，26(3)：429-437等)。然而，为了增强免疫效果的持续性并更有效地诱导对虾的细胞免疫应答，对虾用活疫苗的研究和开发受到重视。以往研制人体和动物用活疫苗的方法主要是将病原体置于各种条件下培养，通过诱导其发生基因突变而确立弱毒株的。采用这种方法研制活疫苗不仅需要很长时间，而且存在很大的盲目 性。而且长期以来，由于担心用于制备减毒活疫苗的病原菌在水体中扩散和毒力回复的危险，各国均不允许使用减毒的活疫苗。现在，应用基因操作技术可以将病原体上有免疫保护性的抗原基因克隆到非致病微生物载体上，从而使这种既能表达目的抗原又没有致病性的微生物充当活疫苗的角色，又称为活载体疫苗。其中以酒精酵母为载体，将目的蛋白表达在酵母菌体的细胞表面作为抗原递呈的口服活疫苗，在小鼠和人体中的研究已有成功的报道。