[发明专利]对虾白斑综合征病毒VP28酵母表面展示与应用

权利要求书

1.一种表面展示对虾白斑综合征病毒VP28重组酵母及其制备方法，是利用酵母表面展示载体，与对虾白斑综合征病毒蛋白VP28基因重组，构建融合表达的重组质粒，并转化酿酒酵母菌得到表面展示VP28的重组酵母菌。

2.如权利要求1所述的表面展示对虾白斑综合征病毒VP28重组酵母及其制备方法，其特征在于，所述的重组酵母为含有对虾白斑综合征病毒蛋白VP28基因的重组酵母菌EBY100，所述的重组酵母菌表面有VP28。

3.如权利要求1所述的表面展示对虾白斑综合征病毒VP28重组酵母菌活疫苗在养殖甲壳动物免疫中的应用。

4.如权利要求2所述的表面展示对虾白斑综合征病毒VP28重组体的制备方法，其特征在于，构建所述的对虾白斑综合征病毒VP28表达载体时，先用EcoRI和XhoI两种限制性内切酶将PCR扩增的VP28产物与pYD1空载体分别双酶切，然后将双酶切的产物连接并转化入感受态大肠杆菌TOP10，PCR筛选插入VP28基因的阳性克隆，测序验证正确的阳性克隆即为重组表达体(pYD1-VP28)。

5.如权利要求4所述的表面展示对虾白斑综合征病毒VP28重组体，其特征在于，它包括：编码VP28的核苷酸序列，或者所述核苷酸序列能在中等严谨条件下与SEQ IDNO.1中1-612位的核苷酸杂交。

6.如权利要求1所述的表面展示对虾白斑综合征病毒VP28重组酵母的制备方法，其特征在于，将所述的重组表达体转化入酵母菌EBY100感受态细胞，再将转化产物涂布在YNB选择培养基上于25-30℃下培养24-48h，挑取长出的单菌落，用菌落PCR的方法筛选阳性转化子，阳性转化子即为表面展示对虾白斑综合征病毒VP28重组酵母。

7.如权利要求1所述的表面展示对虾白斑综合征病毒VP28重组酵母，其特征在于，它包括，具有SEQ NO.2所示的氨基酸序列，或其活性片段，或其活性衍生物。

8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于发酵生产所述的展示对虾白斑综合征病毒VP28重组酵母菌活疫苗时，是将所述的重组酵母菌接种于含1.0-2.5％葡萄糖的YNB-CAA的培养基中，在25-30℃下振荡培养过夜，至OD600值在2-5，离心菌体，用生理盐水悬浮菌体并接入YNB-CAA(含D-半乳糖)液体培养基中，在20-30℃下诱导培养36-60h，将所得的培养物离心并用PBS洗涤，获得重组酵母菌活疫苗。