[发明专利]有核红细胞模拟粒子，血液质控物及其制备方法和用途

说明书

技术领域

本发明涉及血液分析质控物。具体地讲，本发明涉及有核红细胞模拟粒子，包含所述有核红细胞模拟粒子的血液质控物，以及它们的制备方法，和所述有核红细胞模拟粒子和质控物在以荧光-散射光法为检测原理的血液细胞分析仪质量控制上的用途。

背景技术

人类正常成熟红细胞不含有细胞核。但在特殊情况，包括某些病理情况下，人类外周血中会出现有核红细胞(nucleated red bloodcell，NRBC，也称为erythroblast)，即一种幼稚的红细胞。对有核红细胞的检测可以为某些疾病的诊断提供依据。部分高端血液细胞分析仪配备有核红细胞检测功能，其检测原理包括：阻抗法、荧光-散射法等。

对配备有核红细胞检测功能的血液细胞分析仪进行质量控制，需要使用含有有核红细胞模拟粒子的质控物。在有核红细胞模拟粒子的制备方面，已有一些公开的技术方案。

美国专利US7176031和US6962817公开了使用人工合成粒子模拟人有核红细胞的方法。这种方法的缺陷在于合成粒子的生产工艺复杂，成本较高。美国专利US7354767公开了使用普通哺乳动物红细胞(不含细胞核)制备有核红细胞模拟粒子的方法。这种方法制备的模拟粒子与人有核红细胞的细胞核大小接近，适用于采用阻抗法检测有核红细胞的血液细胞分析仪。但这种模拟粒子不含细胞核，不适于模拟人有核红细胞被特定荧光染料染色后的荧光特性。美国专利US7195919公开的技术方案通过在红细胞表面连接生物大分子(如：核酸、肽链等)，使其能够模拟人有核红细胞的荧光特性。这种方法的不足之处在于工艺复杂，且作为原料的生物大分子成本较高。

美国专利US6723563和US6653137提出用鸟类(如火鸡或鸡)、爬行类(如短吻鳄)或鱼类(如鲑鱼)的红细胞为原料制备有核红细胞模拟粒子。美国专利US6406915、US6403377、US6399388、US6221668和US6200500公开了使用火鸡红细胞制备有核红细胞模拟粒子的方法。美国专利US6448085公开了使用鸡红细胞制备有核红细胞模拟粒子的方法。美国专利US6187590和US5858790公开了使用火鸡、鸡和鲑鳟类鱼的红细胞制备有核红细胞模拟粒子的方法。美国专利US7285417、US7135341和US7198953公开了使用短吻鳄红细胞制备有核红细胞模拟粒子的方法。这些技术方案的共同点是：使用带有细胞核的动物红细胞，包括鸟类、爬行类和鱼类的红细胞模拟人有核红细胞。这种方法的不足之处在于，绝大多数鸟类、爬行类和鱼类的红细胞呈椭圆形，与近圆形的人类有核红细胞形态差异较大。因此在某些情况下，这些动物有核红细胞并不能很好的模拟人有核红细胞的特征。例如，运用流式细胞术对细胞进行检测时，椭圆形细胞通过流动室方向不一致，因而产生大小差异很大的前向散射光信号，而圆形或近圆形细胞则不会出现这种状况。

因此，本领域需要采用简单、经济的方法获得的更好模拟效果的有核红细胞模拟粒子，特别是适用于荧光-散射光法为检测原理的细胞血液分析仪质量控制的有核红细胞模拟粒子。

发明内容

本发明一方面提供了一种有核红细胞模拟粒子，所述粒子为结合了荧光染色抑制剂的白细胞或白细胞亚群，所述抑制剂与细胞的细胞核或核酸稳定结合，降低所述粒子在检测时与荧光染料的结合能力。

所述荧光染色抑制剂选自：

非荧光的染料，

荧光量子产率比检测用荧光染料的荧光量子产率低的荧光染料，

荧光光谱与检测用荧光染料的荧光光谱差别大的荧光染料，和

能与核苷结合的化合物。

本发明另一方面提供了一种血液质控物，所述质控物包含本发明所提供的有核红细胞模拟粒子。

本发明又一方面提供了一种有核红细胞模拟粒子的制备方法，所述方法包括，

富集含有白细胞的血液中的白细胞或白细胞亚群，

将得到的白细胞或白细胞亚群悬浮于含有荧光染色抑制剂的细胞处理液中，所述抑制剂与细胞的细胞核或核酸稳定结合，

对所得产物进行洗涤。

所述荧光染色抑制剂选自非荧光染料、荧光量子产率比检测用荧光染料的荧光量子产率低的荧光染料、荧光光谱与检测用荧光染料的荧光光谱差别大的荧光染料和能与核苷结合的化合物。

本发明还一方面提供了一种血液质控物的制备方法，将本发明所提供的有核红细胞模拟粒子与其他血液细胞模拟物，如白细胞、红细胞、血小板等的一种或几种混合与细胞保存液中。

本发明再一方面涉及有核红细胞模拟粒子和质控物在血液细胞分析仪质量控制中的应用。