[发明专利]大型丛生竹愈伤组织诱导与植株再生高效培养基及其培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种适用于慈竹和绵竹等大型丛生竹的培养基和培养方法，具体为大型丛生竹愈伤组织诱导与植株再生高效培养基及其培养方法。

背景技术

目前国内外对竹子的运用范围较多，尤其是用于做纸浆的大型丛生竹，所以对竹子的需求量较大，但是培养大型丛生竹尤其是纸浆用竹时就出现了问题，以往竹的组织培养研究多集中在观赏竹的快繁上，大型丛生竹尤其是纸浆用竹的愈伤组织诱导和植株再生难以培养，目前的国内外相关的资料上均未见报道。

发明内容

本发明正是针对以上技术问题，提供一种适用于大型纸浆用竹的体细胞无性系变异、品种改良及利用基因工程技术进行外源基因的遗传转化的大型丛生竹愈伤组织诱导与植株再生高效培养基及其培养方法。

本发明的具体技术方案如下：

大型丛生竹愈伤组织诱导与植株再生高效培养基，包括MS培养基和愈伤组织诱导与植株再生高效培养基，MS培养基按照以下原料制成：

a)大量元素(mg/L)：硝酸钾(KNO3)1900、硝酸铵(NH4NO3)1650、磷酸二氢钾(KH2PO4)170、硫酸镁(MgSO4.7H2O)370、氯化钙(CaCl2.2H2O)440

b)微量元素(mg/L)：碘化钾(KI)0.83、硼酸(H3BO3)6.2、硫酸锰(MnSO4.4H2O)22.3、硫酸锌(ZnSO4.7 H2O)8.6、钼酸钠(Na2MoO4.2 H2O)0.25、硫酸铜(CuSO4.5 H2O)0.025、氯化钴(CoCl2)0.025

c)有机成分(mg/L)：肌醇100、甘氨酸2、盐酸硫胺素(VB1)0.1、盐酸吡哆醇(VB6)0.5、烟酸(VB5或VPP)0.5

d)铁盐(mg/L)：乙二胺四乙酸二钠(Na2.EDTA)37.3、硫酸亚铁(FeSO24.7H2O)27.8

愈伤组织诱导与植株再生高效培养基配方，按照以下成分组成：

a)主培养基：MS基本培养基+KT 2mg/L+IBA 0.4mg/L+2，4，5-T 2mg/L

b)A培养基(快速分化培养基)：MS基本培养基+KT 2.5mg/L+IAA0.5mg/L

c)B培养基(快速生根培养基)：MS基本培养基+IAA 0.25mg/L+IBA 0.4mg/LMS培养基要求PH 5.6-6.0，蔗糖30％，琼脂7g/L。

大型丛生竹愈伤组织诱导与植株再生高效培养基的制备方法，包括以下步骤：

a)母液的配置：母液1(50×大量元素)

500ml母液称取：41.25g NH4NO3、47.5g KNO3、4.25g KH2PO4、9.25g MgSO4·7H2O

母液2(100×)250ml母液称取：11g CaCl2·2H2O

母液3：(棕色瓶)250ml母液(100×)695mg FeSO4·7H2O、932.5mg

Na2-EDTA

分别溶解，每个试剂溶于120ml水，用电炉或微波炉加热，再混合定容，

母液4(100×微量元素)，

250ml母液称取557.5mg MnSO4·4H2O、215mg ZnSO4·7H2O、205mgH3BO4、20.75mg KI、6.25mg Na2MoO4·2H2O、0.625mg CuSO4·5H2O、0.625mgCoCl2·6H2O

母液5(1000×)100ml母液称取：10mg硫胺酸B1、50mg吡哆醇B6、50mg烟酸、200mg甘氨酸

b)激素的配置：

1mg/ml 2，4，5-T：称取10mg 2，4，5-T于干燥的容器内，加入无水乙醇至完全溶解，用蒸馏水定容至10ml；

1mg/ml NAA或IAA：称取10mg NAA或IAA于干燥的容器内，逐滴加入无水乙醇，至完全溶解。用蒸馏水定容至10ml；

1mg/ml KT：称取10mg KT于干燥的容器内，逐滴加入1M的HCl.至完全溶解，用蒸馏水定容至10ml；

c)NaOH、HCl溶液的配置：

配置100ml 5N NaOH、4N HCl用于调节PH值：20g NaOH定容至100ml的蒸馏水中，34.48ml HCl定容至100ml的蒸馏水中；

d)MS溶液的混合