[发明专利]分离核酸的方法、试剂及套组

说明书

技术领域

本发明是有关于一种分离核酸的方法，且特别有关于一种单一步骤的核酸分离方法与核酸分离试剂。

背景技术

近年来，分子诊断、药物基因体学、转译医学及刑事鉴定等兴起，各种核酸分析的需求也急速增加，然而，不论要进行何种的核酸分析，首先必须要求高纯度的核酸，以及方便、快速的核酸分离方法。

在进行分析时，由于待测物质在液态样本中存在的时间非常短暂，且样本中的杂质会影响在检测的准确度，因此发展出一种核酸的分离技术，即利用一固相载体结合核酸，或是以管柱内壁作为固相载体，再加入微珠至管柱中，利用微珠结合核酸后再将微珠分离出来。此外，目前也发展出利用磁珠分离核酸的方法，主要是利用磁珠结合核酸，再利用磁性将结合核酸的磁珠分离出来。

随着核酸分离的需求愈来愈频繁，所需操作的样本来源也愈来愈广泛，由于磁性分离技术不需离心或抽真空等步骤，因此可节省处理时间及成本。此外，磁性分离的纯化过程快速、操作方便、因此目前磁性分离已逐渐发展成为主要的核酸分离方法。

目前市面上常见的核酸分离技术主要是先处理复杂样本将核酸释出，再利用固相结合分离核酸，固相分离部分应用Boom Patent(美国第5234809号专利)的Chaotropic Salt(离液盐)将样品中的核酸吸附至硅材料(Silica)上，经过清洗步骤之后，再使用冲提(elution，洗脱)缓冲液将硅材料上的核酸冲洗下来，达到分离核酸的效果。此外，美国第6274386号专利则是应用含硅表面材料的磁性固相载体吸附核酸。

然而，不论如何，所有的核酸分离方法皆需经过溶解(1ysis)、萃取、沉淀、清洗、冲提等5个步骤，其所花费的时间较长、且容易污染。因此，本发明提供一快速且方便的核酸分离方法及试剂(组合物)，可省去传统繁复及耗时的多步骤核酸分离方法。

发明内容

本发明是提供一种分离核酸的方法，该方法包括将一分离试剂与一含有核酸的生物样本混合后，所述分离试剂会使核酸自生物样本中分离出来并结合至一固相载体上，不需样本前处理即可以单步骤分离核酸，其特征在于：使用的分离试剂包括1～40wt％的聚乙二醇(PEG)和/或大于30wt％的低分子量醇类、盐类及表面活性剂，通过改变核酸溶解度结合至固相载体。

本发明另提供一种分离核酸的试剂，该试剂包括1～40wt％的聚乙二醇(PEG)和/或大于30wt％的低分子量醇类、一盐类、一表面活性剂、以及一固相载体。

本发明还提供一种分离核酸的套组，该套组包括一分离试剂，其含有1～40wt％的聚乙二醇(PEG)和/或大于30wt％的低分子量醇类、盐类、表面活性剂、固相载体和/或蛋白质水解酶，以及一容器。

较佳的，本发明中：

所述低分子量醇类的分子量为30～100g/mol。

所述低分子量醇类为乙醇。

所述低分子量醇类的重量浓度为40～60％。

所述聚乙二醇的重量浓度为5～20％。

所述固相载体包括金属、金属氧化物、硅化物或聚合物。

所述固相载体包括磁性物质。

所述盐类包括碱金族、碱土族和/或铵盐卤化物。

所述表面活性剂包括Tween-20、Triton X-100、NP40、Brij35或CHAPS。

所述试剂还包括一蛋白质水解酶。

所述试剂还包括一糖类。其中所述试剂包括一多糖类或多糖类衍生物。其中所述多糖类包括肝糖、淀粉、低聚糖、葡聚糖、纤维素、琼脂糖、几丁聚糖、黏多糖、肽聚糖。

所述试剂与生物样本的混合反应温度为约50℃～80℃。

所述生物样本与试剂的混合酸碱值为pH 6～9。

所述生物样本包含有一或多个核酸。

所述生物样本包含有细胞物质。

所述生物样本包括原核生物、真菌、病毒、细胞、血液、羊水、脑脊液，或来自皮肤、肌肉、结膜、胎盘或肠胃道的组织及其组织液。

本发明的方法还可包括在所述生物样本与试剂混合后，进行一清洗程序。该方法还包括在所述清洗程序后，进行一冲提程序。

本发明的套组还可包括一清洗缓冲液和/或一冲提缓冲液。其中所述清洗缓冲液可去除盐类及蛋白质。其中所述冲提缓冲液可将核酸由固相载体上冲洗下来。

本发明的套组中，所述容器用于盛装分离试剂。

为了让本发明的上述和其它目的、特征和优点能更明显易懂，下文特列举较佳实施例，并配合附图，作详细说明。

附图说明

图1为DNA琼胶电泳分析。

具体实施方式