[发明专利]一种结核分枝杆菌重组融合蛋白及其应用无效
申请号: | 200910217951.3 | 申请日: | 2009-12-02 |
公开(公告)号: | CN101838660A | 公开(公告)日: | 2010-09-22 |
发明(设计)人: | 于庭;包洪;滕春燕;于艳辉;常静;肖霞;高艺航;刘秀敏 | 申请(专利权)人: | 吉林大学 |
主分类号: | C12N15/62 | 分类号: | C12N15/62;C12N15/70;C07K19/00;C07K16/12;G01N33/68;G01N33/569;G01N33/558;A61K39/04;A61P31/04 |
代理公司: | 长春市四环专利事务所 22103 | 代理人: | 张铁生 |
地址: | 130012 吉林*** | 国省代码: | 吉林;22 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 结核 分枝杆菌 重组 融合 蛋白 及其 应用 | ||
1.一种结核分枝杆菌重组融合蛋白的基因38Kd-16Kd-11Kd,其特征在于:它的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
2.一种结核分枝杆菌重组融合蛋白,其特征在于:它的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。
3.根据权利要求2所述的一种结核分枝杆菌重组融合蛋白,其特征在于:它来自结核分支杆菌H37RV。
4.根据权利要求2所述的一种结核分枝杆菌重组融合蛋白,其特征在于:它是由下述方法制得:
1)人工合成下述引物:
38-16-11a:ATCGCATATGTGTGGCTCGAAACCACCGAGC
38-16-11b:GATTGTTCATACCACCACCACCGCTGGAAATCGTCGCGATCGC
38-16-11c:GGTGGTGGTGGTATGAACAATCTCGCATTG
38-16-11d:TCCGCAATCACCACCACCACCCTACTTCGTATGGCGATGCG
38-16-11e:GGTGGTGGTGGTGATTGCGGATCCCATGAC
38-16-11f:ATCGCTCGAGTCCCAAGCTTCCTATGCGAA
以结核分支杆菌H37RV为模板进行扩增,制得基因38Kd-16Kd-11Kd;
2)将基因插入达载体pET-28b上,得重组质粒pET-28b-38Kd-16Kd-11Kd;
3)将重组质粒转染至大肠杆菌BL21(DE3)中表达、纯化。
5.一种结核分枝杆菌抗体IgG酶联免疫检测试剂盒,它包括:TB抗原和酶标二抗,其特征在于:TB抗原是权利要求2、3或4所述的一种结核分枝杆菌重组融合蛋白,TB抗原包被量为1.0-8.0μg/孔,酶标二抗工作浓度为2.0-16.0mg/mL。
6.根据权利要求5所述的一种结核分枝杆菌抗体IgG酶联免疫检测试剂盒,其特征在于:TB抗原包被量为2.0μg/孔,酶标二抗工作浓度为4.0mg/mL。
7.一种结核分枝杆菌抗体IgG胶体金试剂盒,它包括:TB抗原、胶体金标记TB抗原和质控线包被兔抗TB抗体,其特征在于:TB抗原是权利要求2、3或4所述的一种结核分枝杆菌重组融合蛋白。
8.根据权利要求7所述的一种结核分枝杆菌抗体IgG胶体金试剂盒,其特征在于:TB抗原喷点浓度为0.25-2.0mg/mL,金标记TB抗原染色液的工作浓度为OD值50.0-100.0,TB抗原喷点量为0.5-1.75μL/cm,金标记TB抗原喷点量为0.5-1.75μL/cm,质控线抗TB抗体包被浓度为0.5-2.0mg/mL。
9.根据权利要求8所述的一种结核分枝杆菌抗体IgG胶体金试剂盒,其特征在于:TB抗原喷点浓度为1.0mg/mL,金标记TB抗原染色液的工作浓度为OD值80.0,TB抗原喷点量为1.0μL/cm,金标记TB抗原喷点量为1.0μL/cm,质控线抗TB抗体包被浓度为1.0mg/mL。
10.根据权利要求2、3或4所述的一种结核分枝杆菌重组融合蛋白在制备单抗、多抗、疫苗及蛋白芯片中的应用。
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