[发明专利]奶山羊GHRHR基因的单核苷酸多态性及其检测方法

说明书

技术领域

本发明属于分子遗传学领域，涉及以奶山羊的功能基因的单核苷酸多 态性(SNP)作为分子遗传标记，特别涉及奶山羊GHRHR基因的单核苷酸 多态性及其检测方法。

背景技术

羊奶具有很高的营养价值，不含过敏原，营养成分均衡，易消化吸收， 与人乳蛋白质组成相似；羊奶的脂肪颗粒体积为牛奶的三分之一，羊奶中 的蛋白质、矿物质，尤其是钙、磷、维生素及微量元素的含量比牛奶略高， 且更利于人体吸收，在国际营养界被誉为“奶中之王”。羊奶由于有膻与味喝 牛奶相比，羊奶的人较少。随着高科技应用于生物制药、食品加工，脱膻 技术的应用给羊奶界蓬勃发展带来可能。虽然奶山羊是我国主要的奶畜之 一，但是我国羊奶的生产同发达国家相比差距巨大，主要是因为我国优秀 奶山羊品种种源不足和种群遗传品质较差。

传统的育种方法应用测试动物的表现型和其亲代、祖代及其它亲属在 小的动物模型中的遗传信息，设想性状受到许多基因遗传差异的影响，每 个基因对性状有相对较小的贡献，因此对性状的估计不可避免有些偏差。 分子遗传标记是近年来现代遗传学发展最快的领域之一，新的方法正在不 断涌现，已定位的标记基因数目与日俱增。这将为数量遗传学提供分子水 平信息，家畜育种也将跨入分子育种阶段。应用分子遗传标记的现代育种 技术是加快良种选育和提高种群遗传品质，从而增加奶山羊的产奶量和改 善乳品质的先进的有效的方法。

分子遗传标记辅助选择就是将现代生物技术与常规选择方法相结合， 通过对遗传标记的选择来间接选择控制某性状的数量性状位点(QTL)，使 之能够同时利用标记位点信息和数量性状的表型信息，更准确估计动物个 体的育种值，提高选择效率，加快育种进展。标记辅助选择主要经历了三 个阶段：第一阶段是家畜各性状间的遗传分析；第二阶段是蛋白质(酶) 标记对数量性状的标记阶段；第三个阶段是分子遗传标记阶段。随着分子 标记技术日渐成熟与丰富，使覆盖整个基因组的标记成为可能，通过与QTL 间的连锁分析，实现分子标记辅助选择的目标。

单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism，SNP)作为新的遗传标 记已广泛应用于基因定位、克隆、遗传育种及多样性的研究。SNP是基因 组中存在的一种数量非常丰富的变异形式，占人类基因组中遗传多态性的 90％以上。SNP与罕见的变异不同，通常在种群中频率等于或小于1％的此 种变异被称为突变，而只有频率大于1％时才被称为单核苷酸多态性。

目前，主要采用几种不同的方法来发现SNPs：DNA序列测定方法、 PCR-SSCP与DNA测序结合法、AS-PCR方法、PCR-RFLP法、TaqMam 技术与分子信标(Molecular Beacons)等。在这些SNP检测技术中，(1)DNA 序列测定法是最为准确的SNP检测方法，但是，其检测费用极其昂贵，且 需要有DNA测序仪等大型仪器，同时，在测序过程中需要非常熟练的技术 人员和经验，所以，DNA序列测定法不是一种应用于生产实际的理想SNP 检测方法；(2)PCR-SSCP与DNA测序结合法检测SNP可以适当降低检测 费用，但是，PCR-SSCP的实验过程比较长，操作比较繁琐，且实验过程中 存在假阳性问题，所以，也并非理想的SNP检测手段；(3)AS-PCR方法 作为一种新型的SNP检测方法，在未来的应用领域中具有非常广阔的前景， 但是，该方法需要设计特别的引物，且只能针对特定的基因位点，同时， 检测过程中还存在误检的概率，因此，目前不具有普遍应用的特点；(4) TaqMam技术与分子信标(Molecular Beacons)都是在荧光能量转移 (Fluorescence Resornance Energ Transfer，FRET)基础上建立起来的，利用荧 光标记及仪器达到检测目的。焦磷酸测序(Pyrosequencing)则是利用测序过 程中可释放的焦磷酸和酶类产生荧光，是不依赖平板胶或毛细管电泳、不 依赖DNA的荧光标记技术，很可能成为未来的主流技术。(5)RFLP-PCR 方法是一种检测SNP的有效技术，在发现SNP位点后引入限制性内切酶进 行切割，然后进行琼脂糖、聚丙烯凝胶电泳分析，就能准确地鉴别SNP位 点。RFLP-PCR方法不仅具有DNA测序法的准确性，又克服了费用昂贵、 繁琐操作、假阳性的缺点，而且所检测的序列位点无特殊性要求。