[发明专利]一种用金磁微粒纯化总核酸的方法

说明书

技术领域

本发明属于核酸纯化领域，涉及一种对总核酸(包括基因组DNA和总 RNA)进行纯化的方法，具体涉及一种用金磁微粒纯化总核酸的方法。

背景技术

在过去的几十年，分子生物学研究经历了突飞猛进的发展。随着技术的进 步，核酸纯化已经成为分子生物学研究准备阶段的必备工作。疾病诊断、克隆、 测序、扩增、杂交、cDNA分析等实验操作的首要步骤就是纯化出完整、高质 量的核酸。因此，寻求快速、可靠、具有可重复性的核酸纯化方法一直以来为 人们所关注。

目前使用的核酸纯化方法大体上可分为液相分离和固相分离两大类。传统 的液相分离纯化方法需要经过一系列复杂的沉淀和清洗步骤，不仅耗时而且费 力。同时，繁多的纯化步骤还增加了核酸降解、核酸损失以及交叉污染的可能 性，造成低得率、低纯度。该方法首先需要用变性剂或离液剂以及蛋白酶对生 物样本进行裂解，再用有机溶剂如酚、氯仿或醇对裂解的生物样本进行处理。 而清理这些对人体有剧毒的有机溶剂又需要一笔昂贵的费用。近些年来，基于 吸附作用的固相分离纯化技术得到了进一步的发展，该吸附过程可通过以下四 种方式得以实现：①在离液剂存在的条件下，核酸与亲水性基质间的氢键作用； ②通过阴离子交换剂实现水相中的离子交换；③亲和吸附；④用于DNA纯 化的分子排阻机制。

利用磁性载体进行的核酸分离纯化属于固相分离纯化法的一种。与非磁性 分离纯化方法相比，磁性分离纯化法具有显著优势，其纯化过程简单、快速且 纯化质量高，无需使用酚、氯仿等有机溶剂。目前，国内此类研究起步较晚， 产品参差不齐，纯化质量不高，而Qiagen、Ambion等国外公司的类似产品价 格又十分昂贵，不能得到普遍应用。

专利CN 1580067A、CN1995052A以及CN 101354938A所涉及的核酸的磁 性分离方法都需对磁粒进行目的核酸探针的修饰，然后再用经过修饰的磁粒分 离纯化得到目的核酸。该过程不但复杂，而且属于特异性分离，不能将生物样 本的总核酸同时纯化出来。

金磁微粒，即组装型磁性复合微粒和核/壳型超顺磁性复合微粒，其制备方 法以及结构组成已经在中国专利ZL 03153486.4和ZL 03124061.5分别进行了公 开，本专利即利用该自主研发的金磁微粒提供一种能够快速、有效且成本低廉 的纯化生物样本总核酸的方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种操作简便、快速、纯化质量高且成本低廉的利用 金磁微粒纯化总核酸的方法，通过此方法能够同时纯化出基因组DNA和RNA。

本发明的技术解决方案是：

一种用金磁微粒纯化总核酸(包括基因组DNA和总RNA)的方法，其特 殊之处在于，该方法包括以下步骤：

1)制备含有总核酸的样品裂解液

用裂解液对生物样本进行裂解，得到含有总核酸的样品裂解液；

2)结合

将金磁微粒与含有总核酸的样品裂解液混合，在结合缓冲液的作用下，形 成金磁微粒-总核酸复合物；

3)清洗

对含有金磁微粒-总核酸复合物的溶液进行磁性分离，弃去上清液，再加入 清洗液混匀，磁性分离，弃上清，得到金磁微粒-总核酸复合物；

4)洗脱

将洗脱液与金磁微粒-总核酸复合物混匀，使总核酸从金磁微粒上转到洗脱 液中，磁性分离直至上清澄清，收集上清液，所得上清液即为纯化得到的总核 酸溶液。

上述步骤4)纯化得到的总核酸，经过核酸酶的处理，还可以分别得到基 因组DNA和总RNA，具体实现方法是：将步骤4)纯化得到的总核酸通过DNase 消化，可以得到总RNA；或将步骤4)纯化得到的总核酸通过RNase消化，可 以得到基因组DNA。