[发明专利]眼内用纳米粒冻干粉及其制备方法

权利要求书

1.一种眼内用纳米粒冻干粉，其特征在于，包括如下成分：聚乳酸PLA或聚乳酸聚乙醇酸PLGA的质量百分比为95％～99％；

具干扰促新生血管生成基因转录作用的质粒的质量百分比为1％～5％；所说的具干扰促新生血管生成基因转录作用的质粒为缺氧诱导因子-1α短发卡式小干扰RNA质粒pshHIF-1α或血管内皮生长因子短发卡式小干扰RNA质粒pshVEGF。

2.根据权利要求1所述的一种眼内用纳米粒冻干粉，其特征在于，包括如下成分：

聚乳酸聚乙醇酸PLGA的质量百分比为98.98％；

缺氧诱导因子-1α短发卡式小干扰RNA质粒pshHIF-1α的质量百分比为1.02％。

3.根据权利要求1所述的一种眼内用纳米粒冻干粉，其特征在于，包括如下成分：

聚乳酸PLA的质量百分比为97％；

缺氧诱导因子-1α短发卡式小干扰RNA质粒pshHIF-1α的质量百分比为3％。

4.根据权利要求1所述的一种眼内用纳米粒冻干粉，其特征在于，包括如下成分：

聚乳酸聚乙醇酸PLGA的质量百分比为99％；

血管生长因子VEGF短发卡式小干扰RNA质粒pshVEGF的质量百分比为1％。

5.一种眼内用纳米粒冻干粉及其制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

首先，将具干扰促新生血管生成基因转录作用的质粒80μg～120μg溶于100～200μl三(羟基甲基)氨基甲烷Tris-EDTA缓冲液作为内水相，在冰浴条件下将其滴加入1ml～2ml含有2％(重量比)可生物降解聚合物聚乳酸PLA或聚乳酸聚乙醇酸共聚物PLGA的二氯甲烷中，进行乳化形成油包水型初乳，同时高速搅拌30000转/分钟～40000转/分钟进行乳化60秒～90秒，形成油包水型初乳，此时从外观看呈白色均匀、不挂壁的乳液，略泛蓝色乳光，静置观察在1小时内无分层；所说的具干扰促新生血管生成基因转录作用的质粒为缺氧诱导因子-1α短发卡式小干扰RNA质粒pshHIF-1α或血管内皮生长因子短发卡式小干扰RNA质粒pshVEGF；

其次，将形成的油包水型初乳滴加入6ml～20ml的1％(w/v)的聚乙烯醇PVA外水相，油相∶外水相＝1∶6～1∶10，高速搅拌3分钟～5分钟，其转速为30000转/分钟～40000转/分钟，形成均匀的水包油包水型复乳；

最后，将上步中制得的水包油包水型复乳在常压下搅拌3小时～4小时，挥发掉有机相，离心机的转速为13000转/分钟～15000转/分钟，离心时间为20分钟～25分钟，温度为3℃～4℃，离心后收集、洗涤沉淀，蒸馏水洗除掉游离的基因及聚乙烯醇PVA，制备成冻干粉，在温度3℃～4℃下保存。

6.根据权利要求5所述的一种眼内用纳米粒冻干粉的制备方法，采取复乳-溶剂挥发法，其特征在于，包括如下步骤：

首先，将具干扰促新生血管生成基因转录作用的100μg缺氧诱导因子-1α短发卡式小干扰RNA质粒pshHIF-1α溶于200μl三(羟基甲基)氨基甲烷Tris-EDTA缓冲液作为内水相，在冰浴条件下将其滴加入2ml含有2％(重量比)聚乳酸聚乙醇酸共聚物PLGA的二氯甲烷中进行乳化形成油包水型初乳，同时高速搅拌，搅拌速度为30000转/分钟进行乳化60秒，此时从外观看呈白色均匀、不挂壁的乳液，略泛蓝色乳光，静置观察在1小时内无分层；

其次，将形成的油包水型初乳滴加入12ml的1％(w/v)聚乙烯醇PVA外水相，油相∶外水相＝1∶6，用搅拌器搅拌4分钟，其转速为30000转/分钟，形成均匀的水包油包水型复乳；

最后，将上步中制得的水包油包水型复乳在通风橱内常压下搅拌4小时，挥发有机相，离心机的转速为13000转/分钟，离心时间为20分钟，温度为4℃，离心后收集、洗涤沉淀，蒸馏水洗除掉游离的基因及聚乙烯醇PVA制备成冻干粉，保存温度为4℃。