[发明专利]黄芩花粉离体萌发液体培养基及测定黄芩花粉活力的方法

权利要求书

1.一种黄芩花粉离体萌发液体培养基用于测定黄芩花粉活力的方法， 其特征在于，包括以下步骤：

1)花粉采集

选取发育正常、无病虫危害的健壮黄芩植株，盛花期于上午7:00～8:00 选取正开花的花序，摘除已开放的小花后连同一段枝叶一同将花序采下，迅 速移入盛有清水的三角瓶中，带回实验室待花蕾自然开放，花粉从花药中散 出，将花粉收集起来备用；

2)花粉离体萌发及花粉管生长

取黄芩花粉离体萌发液体培养基，滴入凹形载玻片凹槽中，用毛笔蘸取 适量黄芩花粉匀撒在液体培养基上，置于底部垫有双层滤纸的培养皿中，盖 紧盖子并放入恒温培养箱内30℃离体光照萌发培养，花粉离体萌发培养 20min后，部分花粉开始萌发，花粉萌发后的花粉管长度超过花粉粒直径后， 花粉管开始快速生长；

所述的黄芩花粉离体萌发液体培养基是以蒸馏水为溶剂，由BK培养基 +100g/L的蔗糖+150g/L的PEG4000组成，pH值为5.8；其中BK培养基由 下列原料组成：H₃BO₃：100mg/L，Ca(NO₃)₂·4H₂O：300mg/L，MgSO₄·7H₂O： 200mg/L，KNO₃：100mg/L；

3)花粉活力的测定

离体光照萌发培养3h后，进行花粉萌发率统计和花粉长度测量；以花 粉管长度大于花粉直径为花粉萌发标准，每处理重复3次，每重复随机观察 3个视野，每视野观察花粉数不少于50粒，统计花粉萌发率反应有活力的 花粉所占比例；同时，用显微测微尺测量花粉管长度，每视野随机测量10 个花粉，每处理共测90个花粉管长度，计算其平均值，花粉离体萌发花粉 管生长情况即可反应花粉粒生理状况的优劣。