[发明专利]黄芩花粉离体萌发液体培养基及测定黄芩花粉活力的方法

说明书

技术领域

本发明属于植物花粉活力测定技术领域，涉及一种培养基，特别涉及一 种黄芩花粉离体萌发液体培养基，以及利用该黄芩花粉离体萌发液体培养基 测定黄芩花粉活力的方法。

背景技术

黄芩(Scutellaria Baicalensis)是唇形科植物，同属植物共有300多种， 广布世界各地，我国有101种及29个变种。黄芩味苦性寒，具有清热燥湿 泻火解毒、凉血止血、除热安胎的功效，也可用于泡茶，有清凉败火、消炎 去暑的功效。

近年来随着黄芩降压、抗变态反应和清除超氧阴离子等药理作用相继被 发现，使社会对黄芩原材料的需求迅速增加，单靠野生黄芩资源已不能满足 需求，目前黄芩已驯化成功并被大面积栽培，以满足社会需求，但各地生产 中优良品种较为缺乏，已严重影响了我国黄芩生产的发展，因此，开展优良 品种的选育是黄芩研究者的一项重要工作。进行黄芩花粉活力测定的研究， 对种质资源保存与创新、优良品种的选育具有理论和实践意义。

黄芩为两性花，开花后花粉成熟并自花粉囊中散出，成熟的花粉粒具有 一定的活力，在田间条件下其活力能保持一定时间，但随时间的推移其活力 会发生一定的变化，了解黄芩开花后花粉活力在田间的变化规律，对黄芩杂 交体系的建立以及黄芩传粉类型的花粉都具有十分重要的意义。目前，花粉 活力测定的方法主要有显微镜形态观察法、染色法、离体萌发法等。

形态观察法是依据不育花粉在生长过程中由于受到某些因素的影响，发 育不完全或不良的花粉粒形态常常呈畸形，而正常花粉有规则的外形。黄芩 正常花粉粒为椭圆形或近圆形，而不育花粉呈不规则形，根据形态可以鉴别 花粉活力。然而，黄芩花粉成熟后常常需要贮藏一段时间，贮藏过程中花粉 活力会逐渐下降，由于黄芩正常花粉在贮藏过程中活力可能丧失，但形态并 不发生明显变化；从而使得花粉粒形态观察法就不能鉴别贮藏后正常花粉活 力变化情况。

染色法是通过使用染色试剂对花粉粒进行染色，依据颜色变化判断花粉 活力的高低，常用的染色试剂有I2-KI溶液和氯化三苯基四氮唑(TTC)等。 用I2-KI溶液对发育良好的黄芩成熟花粉进行染色，花粉粒而没有被染成蓝 色，而呈浅黄褐色，表明I2-KI溶液染色法不能测定黄芩花粉活力；而TTC 染色法测定花粉活力实验重复性较差，会造成很大的实验误差，也不能准确 测定花粉的实际活力高低。

花粉离体萌发与花粉管生长测定结果较为稳定，更能反应花粉活力的实 际状况。但花粉离体萌发需要适宜的培养基，常用的培养基基本成分是糖和 硼酸，蔗糖浓度一般为10％～20％，硼酸为0.001％～0.005％，pH值为5.5～6.5。

不同植物花粉萌发需要的培养基种类和浓度不同，二核型花粉较易萌 发，在一般基本培养基上培养即可，而三核型花粉较难萌发，要在基本培养 基的基础上添加其它促进花粉萌发的元素，如Ca²⁺，Mg²⁺，K²⁺，PEG等成 分。近年来，人们对药用植物花粉离体萌发和花粉管生长进行了较多研究， 赵宏波等认为PEG对菊花、梅花花粉离体萌发生长具有显著促进作用；牛 东玲等报道了肉苁蓉花粉离体萌发的适宜培养基，陈和明等研究了黄藤花粉 离体萌发条件及低温贮藏对花粉活力的影响。然而，关于黄芩花粉离体萌发 与花粉管生长的研究国内外尚未见报道。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种黄芩花粉离体萌发液体培养基及其用于测 定黄芩花粉活力的方法，在确定黄芩花粉离体萌发培养体系的基础上，对黄 芩花粉离体培养，并能够可靠、有效的测定黄芩花粉活力。

为了实现上述任务，本发明是通过以下技术方案得以实现：

一种黄芩花粉离体萌发液体培养基，其特征在于，制得的该黄芩花粉离 体萌发液体培养基是以蒸馏水为溶剂，由100g/L的蔗糖、150g/L的PEG、 以及BK培养基组成，pH值为5.8；

所述BK培养基由下列原料组成：H₃BO₃：100mg/L，Ca(NO₃)₂·4H₂O： 300mg/L，MgSO₄·7H₂O：200mg/L，KNO₃：100mg/L。