[发明专利]用金属氧化物富集糖肽及同时富集糖肽和磷酸化肽的方法

权利要求书

1.用金属氧化物富集糖肽及同时富集糖肽和磷酸化肽的方法，其特征在于：以金属氧化物作为固相萃取材料，富集蛋白酶解物中的糖肽或同时富集磷酸化肽和糖肽。

2.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：所述金属氧化物为氧化钛、氧化锆、氧化铝中的一种或多种复合金属氧化物。

3.按照权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述金属氧化物材料形态为纳米材料、微球材料以及金属氧化物涂覆或包覆的球形或无定形材料。

4.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：所述富集的过程为柱萃取，具体操作如下：

1)将金属氧化物装入萃取柱管中，将pH为5-8蛋白酶解物上样到萃取柱中，蛋白酶解物与金属氧化物材料的重量比例为1∶1～200；

2)分别用1～10倍柱体积的盐溶液、1～10倍柱体积的含有有机酸的乙腈水溶液冲洗萃取柱，乙腈的体积浓度为0-95％；

3)采用1～10倍柱体积的含有有机酸的乙腈水溶液洗脱糖肽，乙腈的体积浓度为0-95％；

4)采用1～10倍的柱体积的0.5-25wt％氨水洗脱得到磷酸化肽。

5.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：所述富集的过程为离心或过滤，具体操作如下：

1)将金属氧化物与pH为5-8的蛋白酶解物混合，蛋白酶解液中内含的蛋白酶解物与金属氧化物材料的重量比例为1∶1～200，孵化1～180分钟，离心或过滤分离，弃上层溶液，收集沉淀；

2)将2-100倍固体体积的盐溶液、2-100倍固体体积的含有有机酸的乙腈水溶液分别与沉淀混合震荡1～180分钟，乙腈的体积浓度为0-95％，离心或过滤分离，弃上层溶液，收集沉淀；此过程重复1-10次；

3)将1-50倍固体体积的含有有机酸的乙腈水溶液与沉淀混合震荡1～150分钟，乙腈的体积浓度为0-95％，离心或过滤分离，收集上清液以及沉淀，上清液即为糖肽；

4)将0.5-25wt％氨水与沉淀混合震荡1～180分钟，离心或过滤分离，收集上清液，弃去沉淀，上清液即为磷酸化肽。

6.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：所述富集的过程采用金属氧化物包覆磁珠进行，具体操作如下：

1)将pH为5-8磁珠与蛋白酶解物混合，蛋白酶解液中内含的蛋白酶解物与磁珠材料的重量比例为1∶1～200，孵化1～180分钟，在磁场作用下分离磁珠和上清液，弃上层溶液，收集磁珠；

2)将2-100倍固体体积的盐溶液、2-100倍固体体积的含有有机酸的乙腈水溶液分别与磁珠混合震荡1～180分钟，乙腈的体积浓度为0-95％，在磁场作用下分离磁珠和上清液，弃上层溶液，收集磁珠，此过程重复1-10次；

3)将1-50倍固体体积的含有有机酸的乙腈水溶液与磁珠混合震荡1～180分钟，乙腈的体积浓度为0-95％，在磁场作用下分离磁珠和上清液，收集上清液以及磁珠，上清液即为糖肽；

4)将1-50倍固体体积的0.5-25wt％氨水与磁珠混合震荡1～180分钟，在磁场作用下离心磁珠和上清液，收集上清液，磁珠可以再利用，清液即为磷酸化肽。

7.按照权利要求4、5或6所述的方法，其特征在于：所述盐溶液为10～1000mmol/L氯化钠、磷酸盐、碳酸盐中一种或多种；所述有机酸为甲酸、乙酸或三氟乙酸。

8.按照权利要求4、5或6所述的方法，其特征在于：所述步骤2)中的有机酸溶液体积浓度为0～10％；所述步骤3)中的有机酸溶液体积浓度为0.01～20％。