[发明专利]包含多不饱和脂肪酸的微生物油的制备

说明书

本申请是基于中国专利申请03814383.6的分案申请。

技术领域

本发明涉及到一种生产PUFA的方法，所述PUFA可以是微生物油中的，该方法包含：采用两阶段法培养微生物，然后从该微生物中回收微生物油。本发明还涉及用该方法获得的新颖的(例如微生物的)油。在所述的油中，50％或者更多的油脂类(或PUFA，例如在所述的油里)是花生四烯酸(arachidonic acid，ARA)。这种油可能具有低于2.5或2.0的低过氧化值(peroxide value，POV)和/或低于1.0的低茴香胺值(anisidinevalue，AnV)。本发明还涉及包含本发明的微生物油或利用本发明的微生物油制造的食品和食物添加剂。

背景技术

多不饱和脂肪酸(polyunsaturated fatty acid)，或PUFA，可以在自然界中发现。各种各样不同的PUFA产生自不同的单细胞生物(藻类、真菌等)。一种特别重要的PUFA是花生四烯酸(ARA)，它是若干种长链多不饱和脂肪酸(LC-PUFAs)之一。化学上，花生四烯酸是顺式-5，8，11，14-二十碳四烯酸(20:4)，属于LC-PUFA的(n-6)族。

花生四烯酸是多种具有生物活性的化合物的主要前体，这些化合物合称为类二十烷酸(eicosanoid)，其中包括前列腺素(prostaglandin)、凝血噁烷(thromboxane)和白细胞三烯(leukotriene)。花生四烯酸还是人类母乳脂类成分(lipid fraction)的组分之一，并被认为对婴儿的理想神经发育来说不可或缺。花生四烯酸具有各种各样的不同应用，包括用于婴儿配方食品(infant formula)、食品和动物饲料。

花生四烯酸可以利用微生物特别是利用丝状真菌Mortierella来生产。然而，花生四烯酸在得到的微生物油中的百分比通常非常低。人们为此进行过很多尝试，试图提高Mortierella的花生四烯酸产量，但是取得的成功却程度各异。很多提高花生四烯酸水平的尝试，都包括在工业环境中不易使用的步骤。

例如，Broshin et al，Process Biochemistry：(35)2000，pp1171-1175，将培养物在发酵结束后放置一周左右的时间。其中提到的ARA的量是基于生物量(biomass)(而不是基于从其中提取出来的油)的，因为该篇文献中没有描述过任何油的提取。Totani et al，Industrial Applications of singlecell oils，American Oil Chemists’Society Campaign，1992，Chapter 4，pp52-60和Lipids，Vol.22No.12(1987)，pages1060-1062，提出了用罕见的低发酵温度进行发酵，这意味着发酵会相当地慢。此处的ARA含量基于氯仿/甲醇溶剂混合物的萃取物。另一篇花生四烯酸制造领域的文献是WO96/21037。

EP-A-1035211(Suntory)描述了一种从M.alpina中生产ARA和双高-γ-亚麻酸(dihomo gamma-linolenic acid，DHGLA)油脂类的方法。然而，其ARA含量的计算基于生物量(而非从中提取的油)或由一种分析方法产生，其中多不饱和脂肪酸先被酯化，然后再用一种溶剂来萃取(而不是先行萃取，产生一种油，再在这种油的基础上测定出ARA的含量)。

一篇关于ARA的更高产量的报道宣称，采用M.alpina的1S-4株系，在收获的菌丝体中浓度接近70％(Shimizu S.，Oils-Fats-Lipids 1995，Proc.World Congr.Int.Soc.Fat Res.，21^st(1996)，Meeting Date 1995，Volume 1，pages 103-109和Biochemical and Biophysical Research communications，Vol.150(1)，1988，pages335-441)。但是，这个百分比是基于细胞的，与微生物油中的ARA的百分比并不一样。事实上，制成的油仅提供了39.0％的ARA含量(表27.2，第105页)。(注意，本领域中使用了各种不同的方式来测量ARA的含量，它们与本说明书后面所提供的数据不一定具有相同的单位或基于相同的分析方案)。此外，这还仅仅是在M.alpina细胞于发酵后再在室温中被多放置了六天才得到的，而对工业生产过程来说这明显不是可行的选择。