[发明专利]兔三联灭活疫苗及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种动物灭活疫苗，尤其涉及一种兔三联灭活疫苗及其制备方法，本发明还涉及该兔三联灭活疫苗在预防兔病毒性出血症、多杀性巴氏杆菌病或/和产气荚膜梭菌病(A型)中的应用，属于动物灭活疫苗领域。

背景技术

兔病毒性出血症是由杯状病毒引起的一种急性、致死性传染病，本病发病急、病程短、传播快、流行广，2月龄以上家兔均易感，无明显季节性，其发病率和死亡率可高达100％。该病一旦爆发，将给养兔业造成巨大经济损失。兔多杀性巴氏杆菌病是一种多型性疾病，以A型兔多杀性巴氏杆菌病为主，急性病例的发病率和死亡率均很高，慢性病例虽然死亡率不高，但因治愈困难而经济损失巨大。由于本病尤其是慢性病例的药物治疗效果不明显，一旦巴氏杆菌病在兔场发生就很难清除本病，因此，使用疫苗控制本病便成为一种行之有效的办法。兔A型产气荚膜梭菌病是一种急性消化道传染病，是我国家兔急性腹泻的主要病源，通过消化道或损伤黏膜进入动物体内。发病诱因包括饲养不当，青饲料短缺，粗纤维含量低，长途运输，气温骤变等。除哺乳仔兔外，不同年龄、品种、性别的家兔对本病均易感。以1-3周龄仔兔发病率最高，本病一年四季均可发生，以冬春两季常见。近年来在我国不少地区均有发生，该病以急性剧烈腹泻和迅速死亡为主要特征，其发病率可高达90％，死亡率高达100％，由于使用药物很难治疗本病，造成的经济损失不容低估，因而该病应使用疫苗控制。由于这三种疾病是目前养兔业危害最为严重的疾病，因此，有关兔病毒性出血症、兔多杀性巴氏杆菌病和兔A型产气荚膜梭菌病疫苗的研究工作一直备受国内外学者关注。

纵观国内外有关兔病毒性出血症、兔巴氏杆菌病和兔产气荚膜梭菌病疫苗的研究现状，其防制疫苗均为灭活疫苗，其中兔病毒性出血症疫苗均为组织灭活疫苗。值得关注的是国内家兔疫苗多为单苗，要防几种疾病，必须分几次进行注射，增加了动物的应激反应，降低生产性能。针对该问题，现已有少量联苗，但多为二联苗，如：兔病毒性出血症、巴氏杆菌病二联灭活疫苗，兔巴氏杆菌病、产气荚膜梭菌病二联灭活疫苗等。目前国内仍没有兔病毒性出血症、多杀性巴氏杆菌病、产气荚膜梭菌病(A型)三联灭活疫苗产品。从佐剂类型上看，主要有普通水剂疫苗、铝胶佐剂疫苗和蜂胶佐剂疫苗，油佐剂疫苗较少见，在实际应用中这些疫苗均取得了较为理想的防制效果。

发明内容

本发明首先所要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种安全性好、可同时有效预防兔病毒性出血症、兔多杀性巴氏杆菌病和兔产气荚膜梭菌病(A型)的兔三联灭活疫苗。

本发明首先所要解决的技术问题是通过以下技术方案来实现的：

一种兔三联灭活疫苗，主要由灭活脱毒的兔病毒性出血症病毒液、灭活脱毒的兔多杀性巴氏杆菌苗菌液和灭活脱毒的兔A型产气荚膜梭菌苗菌液按照1∶1∶2的体积比所组成。

为了达到更好的免疫或保护效果，优选的，每只份疫苗中含A型产气荚膜梭菌数不低于2×10⁷CFU/ml；每只份疫苗中含兔多杀性巴氏杆菌数不低于5.0×10⁹CFU/ml。

更优选的，所述的灭活脱毒后的兔病毒性出血症病毒液是将所制备的兔病毒性出血症病毒原液稀释50倍后的稀释液。

本发明所要解决的另一个技术问题是提供一种制备上述兔三联灭活疫苗的方法；

本发明所要解决的另一个技术问题是通过以下技术方案来实现的：

一种制备上述兔三联灭活疫苗的方法，包括：

(1)分别制备兔病毒性出血症病毒液、兔多杀性巴氏杆菌苗菌液和兔A型产气荚膜梭菌苗菌液；将兔病毒性出血症病毒液灭活脱毒后的原液稀释50倍，备用；将兔多杀性巴氏杆菌苗菌液灭活脱毒后的原液浓缩2倍，备用；将兔A型产气荚膜梭菌苗菌液灭活脱毒后的原液浓缩4倍，备用；

(2)将上述步骤所制备的兔病毒性出血症病毒液、兔多杀性巴氏杆菌苗菌液和兔A型产气荚膜梭菌苗菌液按照1∶1∶2的体积进行配苗，加入硫柳汞至混合物总体积的0.005％，充分混匀，即得；

优选的，所述兔病毒性出血症病毒液可参考以下方法制备得到：

一、生产用毒种制备

将兔病毒性出血症病毒毒种(例如可以是兔病毒性出血症病毒AV33株)稀释后接种健康易感的家兔；无菌采集接种后24-72h濒死或刚死亡且有典型病理变化家兔的肝、脾经检验合格后，保存作为生产用毒种备用；

二、制苗用病毒液的制备